Дисков дифузионен метод
Не повече от 6 диска, импрегнирани с антибиотици, се поставят върху повърхността на плътна хранителна среда, засята върху непрекъсната морава с тестовата култура, на разстояние най-малко 2 cm един от друг. Резултатите се записват след 18-24 часа инкубация в термостат според диаметъра на зоната без растеж около дисковете с антибиотици. Наличието на растеж около диска показва нечувствителността на този микроб към антибиотика. За тълкуване на резултатите се използват специални таблици.
Фигура 1. Определяне на чувствителността
микроорганизми, използващи метода на дискова дифузия:
1 – микроорганизъм чувствителенкъм антибиотик;
2 – микроорганизъм средно устойчивикъм антибиотик;
3 – микроорганизъм стабиленкъм антибиотик.
Е-тест метод
Принцип на метода. Определянето на чувствителността на микроорганизма се извършва подобно на тестването по метода на дисковата дифузия. Разликата е, че вместо антибиотичен диск се използва Е-тест лента, съдържаща градиент на концентрацията на антибиотик от максимална към минимална. В пресечната точка на елипсоидалната зона на инхибиране на растежа с Е-тест лентата се получава стойността на минималната инхибираща концентрация (MIC).
Фигура 2. Определяне на чувствителността на микроорганизмите с помощта на Е-тестове
Метод на серийно разреждане в бульонна среда
Серийни двукратни разреждания на антибактериалното лекарство се приготвят в епруветки, съдържащи 1 ml бульон на Мюлер-Хинтън, например 100 µg/ml – 1-ви, 50 µg/ml – 2-ри, 25 µg/ml – 3-ти, 12,5 µg/ml – 4-ти и т.н. След това към всяка епруветка се добавят 0,1 ml от тестваната бактериална суспензия. В същото време се прилага контрол на растежа (1 ml бульон на Mueller-Hinton и 0,1 ml бактериална суспензия). Посевите се инкубират при 37°C за 18-24 часа, след което се отбелязват резултатите. Липсата на мътност в средата показва забавяне на бактериалния растеж в присъствието на дадена концентрация на лекарството.
Фигура 3. Определяне на стойността на MIC чрез разреждане в течна хранителна среда
Минималната инхибираща концентрация (MIC) е най-ниската концентрация на антибиотик (в μg/ml или mg/l), която напълно инхибира видимия бактериален растеж in vitro.
2 Определяне на чувствителността на различни щамове стафилококи към антибиотици с помощта на стандартния дисков метод
|
Антибиотик |
Зона на инхибиране на растежа, mm |
Характеристики на щама |
Изследваната култура е чувствителна към ____________________________________________________
умерено устойчив на _____________________________________________________________________________,
устойчиви на _________________________________________________________________________________.
3 Определяне на минималната инхибиторна концентрация (MIC) на пеницилин чрез метода на серийни разреждания.
Заключение: MIC на пеницилин за изследвания щам е _____________________________________
Предимства на метода:_________________________________________________________________________________
Недостатъци на метода:________________________________________________________________________________
4 Идентифициране и регистриране на антагонистичните ефекти на различни видове бактерии.
Микроб-антагонист и тестови щамове, перпендикулярни на него, се инокулират с ивица по диаметъра върху плака с MPA. Резултатите се записват един ден след сеитбата. Наличието и степента на антагонистично действие се определя от размера на зоните на инхибиране на растежа на тестовите култури.
Редова сеитба________________________________
Заключение:най-големият антагонистичен ефект е открит за тестови щамове (посочете видовете) _________________________________________________________________________________________________
УРОК № 8
ТЕМА:ЗАКЛЮЧИТЕЛЕН УРОК НА ТЕМА: “ИСТОРИЧЕСКИ ЕТАПИ В РАЗВИТИЕТО НА МИКРОБИОЛОГИЯТА, МОРФОЛОГИЯТА, ФИЗИОЛОГИЯТА И ГЕНЕТИКАТА НА МИКРООРГАНИЗМИТЕ.”
Форми и размери на истински бактерии. Характеристики на сферични, пръчковидни и извити форми на истински бактерии.
Структура на бактериите. Основните разлики между прокариотна клетка и еукариотна клетка.
Клетъчна стена на грам-положителни и грам-отрицателни бактерии.
Видове микроскопски препарати. Техника за приготвяне на фиксирани препарати.
Техника на микроскопия в светлинен микроскоп.
Изследване на морфологията на микроорганизмите в електронен микроскоп.
Тинториални свойства на микробите. багрила. Прости методи за оцветяване на фиксирани препарати.
Принципи на класификация на патогенни прокариоти (Burgee, 2001).
Защитни устройства в микроорганизмите.
Спори, етапи и условия на спорообразуване, биологично значение.
Бактериални капсули, тяхното значение.
Камшичета, тяхната структура. реснички. Сексуално пиене.
Спирохети.
Систематично разположение и морфология на спирохетите. Характеристики на ултраструктурата и химичния състав. Методи на изследване.
Актиномицети, морфология, ултраструктура, химичен състав. Патогенни видове. Ролята на актиномицетите в природата и медицината. Методи за откриване.
Таксономия на хламидиите. Морфология, структура, методи за откриване. Цикъл на развитие на хламидия.
Рикетсии, морфология, ултраструктура, химичен състав. Патогенни видове.
Микоплазми.
Класификация. Филогенеза. Методи за откриване.
Дефектни форми на микроби: протопласти, сферопласти, L-форми.
Хранене на бактерии. Хранителните вещества са източници на въглерод и азот. Класификация на бактериите по начин на хранене Автотрофи и хемоорганотрофи
Фактори на растежа и техните източници. Източници на минерални елементи.
Методи и механизми за пренос на хранителни вещества през мембраната.
Енергийни нужди на бактериите. Начини за получаване на енергия от автотрофи (фотосинтеза, хемосинтеза). Източници и начини за получаване на енергия в хемоорганотрофите.
Аеробни и анаеробни видове биологично окисление в бактериите. Аеробни, анаеробни, факултативно анаеробни и микроаерофилни бактерии. Методи за създаване на анаеробни условия.
Цели, етапи, предимства и недостатъци на бактериологичния (културен) метод на изследване.
Растеж и размножаване на микроорганизми. Методи за размножаване. Бинарно (просто) делене, механизъм. Размножаване на бактериални популации.
Принципи и методи на култивиране на бактерии.
Хранителните нужди на микробите.
Хранителни среди за култивиране на бактерии.
Изисквания към хранителните среди.
Класификация на хранителните среди.
Условия и методи за култивиране на бактерии.
Техника на засяване върху хранителни среди.
Бактериофаги (фаги). История на откритието. Морфология, структурни особености, химичен състав и свойства на фагите.
Вирулентни фаги. Фази на взаимодействие с бактериална клетка. Резултати от взаимодействието между фаг и клетка. Умерени фаги. Профаг.
Явлението лизогения. Фагово преобразуване.
Методи за изолиране и титруване на бактериофаги върху твърди и течни хранителни среди. Приложение на фагите в микробиологията и медицината. Фагова диагностика и фаготипизиране. Наследственост. Организация на генетичния апарат при бактериите (нуклеоиди, плазмиди,Е
-последователности, транспозони).
Принципи на функциониране на бактериалния геном. Организация на оперона. Генотип и фенотип.
Плазмиди, класификация, структура и свойства на плазмидите. R-плазмид, особености на структурата и функцията. Бактериоциногенни плазмиди.
Микробна вариабилност. Изменения в бактериите, значение, основни прояви и свойства (ненаследствен характер, адаптивност, висока честота на директни и обратни промени, множество индуциращи фактори).
Генотипна изменчивост. Мутации и тяхната класификация.
Мутагени. Фенотипни прояви на мутации. Съдбата на мутантите. Дисоциация при бактерии.
Влиянието на селекцията. Система за възстановяване на увреждане на генома.
Рекомбинационна променливост. Механизми на образуване на комбинирани геноми. Честота на промени в индивидуалните характеристики.
Трансформация, трансдукция, конюгация.
Практическо значение на знанията за генетиката на микробите.
Принципи на генетичното картиране.
Химиотерапевтични лекарства. Свойства. Основни групи химиотерапевтични лекарства. Механизми на действие върху бактериите. Концепцията за селективност и „мишени“ на действие.
антибиотици.
Определение. Производители на антибиотици.
Синтетични и полусинтетични антибиотици.
Основни групи антибиотици по химична структура. Бета-лактамни антибиотици Тетрациклини. Аминогликозиди. Макролиди и азолиди. Ансамицини (рифампицини).
Левомицетин. Флуорохинолонови антибиотици.
Линкомицин. Полимиксини. Гликопептиди9
ТЕМА:Класификация на антибиотиците въз основа на механизма на действие върху бактериалната клетка.
Механизми на резистентност на микроорганизмите към антибактериални лекарства.
Методи за определяне на чувствителността на бактериите към антибиотици и други химиотерапевтични лекарства. . Техника за настройка, запис и оценка на чувствителността по метода на диска, Е-тест, серийни разреждания.
УРОК №
ЕКОЛОГИЯ НА БАКТЕРИИТЕ. ИНФЕКЦИЯ. ПАТОГЕННИ МИКРООРГАНИЗМИ. МИКРОБНИ ТОКСИНИ. БИОЛОГИЧЕН (ЕКСПЕРИМЕНТАЛЕН) МЕТОД.
КОНТРОЛЕН СПИСЪК
Микрофлора на човешкото тяло
Нормална (резидентна) човешка микрофлора. Автохтонна и алохтонна, париетална и луминална микрофлора.
Формиране и развитие на нормална микрофлора. Функции на нормалната микрофлора: противоинфекциозни, метаболитни, имунобиологични, антитоксични.
Класификация на инфекциозните процеси по тежест, естество на патогена, източник на инфекция, начин на предаване на патогена и механизъм на инфекция и разпространение.
Класификация на инфекциозните процеси според локализацията на микробното огнище, продължителността на протичане и честотата на инфекцията.
Динамика на инфекциозния процес, неговите характеристики.
Биологичен (експериментален) метод на изследване, етапи, оценка. Лабораторни животни.
Методи на заразяване.
ЛАБОРАТОРНА РАБОТА 1 Изследване на нормалната микрофлора..
А) Засяване за изследване на нормалната микрофлора на кожата на ръцете върху среда Endo и кръвен агарметод на реплика
Принцип на метода:
навлажнете стерилни парчета филтърна хартия 1x1 cm в петриево блюдо със стерилен физиологичен разтвор. решение. С помощта на стерилни пинсети поставете лист хартия върху повърхността на кожата, която ще изследвате за 0,5 минути. Поставете хартията върху повърхността на плътна хранителна среда (отпечатък) за 1 минута. Отстранете хартията. Инкубирайте плаките с отпечатъци при 37 0 С за 24-48 часа.
В) Провеждане на запис на инокулация на микрофлора, приготвяне на препарати от различни видове колонии, оцветяване по Грам, микроскоп (при демонстрационни инокулации).
|
Отчитане на инокулацията на микрофлора: _______________________ Микроскопия на препарати: _______________ _______________________ |
Отчитане на инокулацията на микрофлора: _______________________ Микроскопия на препарати: _______________ _______________________ |
2 Подготовка______________Оцветяване. Оценка на адхезивносттад
А) Засяване за изследване на нормалната микрофлора на кожата на ръцете върху среда Endo и кръвен агарколи
чрез способността им да се адсорбират върху повърхността на червените кръвни клетки
3 Към суспензията от еритроцити се добавя тестовата култура от микроорганизми. След инкубацията се приготвят петна, оцветяват се и под микроскоп се определя средният брой бактерии, адсорбирани върху една червена кръвна клетка.
1. В този случай червените кръвни клетки се използват като моделна клетка на чувствителен микроорганизъм.
Определяне на ензими за инвазивност при стафилококи
2.Плазмокоагулаза
Принцип на метода: Тестовата култура се добавя към епруветка, съдържаща цитратна заешка кръвна плазма. След инкубиране в термостат резултатът се взема предвид. Ако резултатът е положителен, плазмата се съсирва (коагулира).
3.Фибринолизин
Принцип на метода: Тест културата се добавя в епруветка с фибрин (кръвен съсирек, измит от червените кръвни клетки). След инкубиране в термостат резултатът се взема предвид. Ако резултатът е положителен, съсирекът се разтваря.
4.Хиалуронидаза
Принципът на метода: изолираните стафилококови култури се инокулират върху жълтъчно-солев агар, който съдържа 7,5% натриев хлорид и жълтъчна суспензия. Ако резултатът е положителен, около колониите от вирулентни стафилококи се образува дъгов ореол поради разграждането на лецитина, съдържащ се в жълтъка на пилешко яйце.
Заключение: (избройте вирулентните ензими на всеки от двата изследвани щама) ________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Бактериални токсини
Токсичност ________________________________________________________________________________
Токсигенност _________________________________________________________________________________
Ендотоксин _________________________________________________________________________________
Ендотоксичен шок ___________________________________________________________________________
Практическо приложение на ендотоксините:
Екзотоксин ______________________________________________________________________________________
Анатоксин _________________________________________________________________________________
Схема за получаване на екзотоксин и токсоид.
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________________________
Практическа употреба на токсоиди:
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________________________
В лекцията се разглеждат основните методи за определяне на чувствителността ин витромикроорганизми към антимикробни лекарства (дискова дифузия, Е-тестове, методи на разреждане). Отразени са подходи за емпирично и етиотропно предписване на антибиотици в клиничната практика. Обсъждат се проблемите на интерпретацията на резултатите от определянето на чувствителността от клинична и микробиологична гледна точка.
Понастоящем в клиничната практика има два принципа за предписване на антибактериални лекарства: емпиричен и етиотропен. Емпирично предписване на антибиотицивъз основа на познания за естествената чувствителност на бактериите, епидемиологични данни за резистентността на микроорганизмите в региона или болницата, както и резултатите от контролирани клинични проучвания. Несъмнено предимство на емпиричното предписване на химиотерапия е възможността за бързо започване на терапията. Освен това този подход елиминира разходите за допълнителни изследвания.
Въпреки това, ако продължаващата антибактериална терапия е неефективна, в случай на нозокомиални инфекции, когато е трудно да се отгатне патогенът и неговата чувствителност към антибиотици, те са склонни да провеждат етиотропна терапия. Етиотропно предписване на антибиотицивключва не само изолиране на инфекциозния агент от клиничен материал, но и определяне на неговата чувствителност към антибиотици. Получаването на правилни данни е възможно само при компетентното изпълнение на всички етапи на бактериологичното изследване: от вземането на клиничен материал, транспортирането му до бактериологична лаборатория, идентифицирането на патогена до определянето на неговата чувствителност към антибиотици и тълкуването на получените резултати.
Втората причина за необходимостта от определяне на чувствителността на микроорганизмите към антибактериални лекарства е получаването на епидемиологични данни за структурата на резистентност на патогени на придобити в обществото и нозокомиални инфекции. На практика тези данни се използват при емпирично изписване на антибиотици, както и за формиране на болнични формуляри.
Методи за определяне на чувствителността към антибиотици
Методите за определяне на чувствителността на бактериите към антибиотици се разделят на 2 групи: методи на дифузия и разреждане.
При определяне на чувствителността чрез метода на дисковата дифузия, бактериална суспензия с определена плътност (обикновено еквивалентна на стандарт за мътност на McFarland от 0,5) се нанася върху повърхността на агар в петриево блюдо и след това се поставят дискове, съдържащи определено количество антибиотик . Дифузията на антибиотика в агара води до образуването на зона на потискане на растежа на микроорганизмите около дисковете. След инкубиране на съдовете в термостат при температура 35 o -37 o C за една нощ, резултатът се взема предвид чрез измерване на диаметъра на зоната около диска в милиметри ().
Фигура 1.Определяне на чувствителността на микроорганизмите по метода на дисковата дифузия.
Определянето на чувствителността на микроорганизма с помощта на Е-теста се извършва подобно на тестването чрез метода на дискова дифузия. Разликата е, че вместо диск с антибиотик се използва Е-тест лента, съдържаща градиент на концентрациите на антибиотици от максимум към минимум (). В пресечната точка на елипсоидалната зона на инхибиране на растежа с Е-тест лентата се получава стойността на минималната инхибираща концентрация (MIC).
Фигура 2.Определяне на чувствителността на микроорганизмите с помощта на Е-тестове.
Безспорното предимство на дифузионните методи е лекотата на тестване и достъпността във всяка бактериологична лаборатория. Въпреки това, предвид високата цена на Е-тестовете, методът на дискова дифузия обикновено се използва за рутинна работа.
Методи за отглежданесе основават на използването на двойни серийни разреждания на антибиотични концентрации от максимум до минимум (например от 128 μg/ml, 64 μg/ml и т.н. до 0,5 μg/ml, 0,25 μg/ml и 0,125 μg/ml). В този случай антибиотикът в различни концентрации се добавя към течна хранителна среда (бульон) или към агар. След това бактериална суспензия с определена плътност, съответстваща на стандарта за мътност на McFarland от 0,5, се поставя в антибиотичен бульон или върху повърхността на агарово блюдо. След инкубация за една нощ при температура 35 o -37 o C, получените резултати се записват. Наличието на растеж на микроорганизми в бульона (мътност на бульона) или на повърхността на агара показва, че дадената концентрация на антибиотика е недостатъчна, за да потисне неговата жизнеспособност. С увеличаването на концентрацията на антибиотика растежът на микроорганизма се влошава. Първата най-ниска концентрация на антибиотик (от серия от серийни разреждания), при която бактериалният растеж не се определя визуално, се счита за минимална инхибираща концентрация (MIC). MIC се измерва в mg/l или μg/ml ().
Фигура 3.Определяне на стойността на MIC чрез разреждане в течна хранителна среда.
Тълкуване на резултатите от чувствителността
Въз основа на получените количествени данни (диаметър на зоната на инхибиране на растежа на антибиотици или стойност на MIC), микроорганизмите се разделят на чувствителни, умерено устойчиви и устойчиви (). За разграничаване на тези три категории чувствителност (или резистентност) т.нар гранични концентрации(гранична точка) антибиотик (или гранични стойности на диаметъра на зоната на инхибиране на растежа на микроорганизма).
Фигура 4.Тълкуване на резултатите от определяне на чувствителността на бактериите в съответствие със стойностите на MIC.
Граничните концентрации не са неизменни стойности. Те могат да бъдат преразгледани в зависимост от промените в чувствителността на микробната популация. Разработването и преразглеждането на критериите за интерпретация се извършват от водещи специалисти (химиотерапевти и микробиолози), които са членове на специални комисии. Един от тях е Националният комитет на САЩ за клинични лабораторни стандарти (NCCLS). В момента стандартите на NCCLS са признати в целия свят и се използват като международни стандарти за оценка на резултатите от определяне на чувствителността на бактериите в многоцентрови микробиологични и клинични изследвания.
Има два подхода за тълкуване на резултатите за чувствителност: микробиологичен и клиничен. Микробиологичната интерпретация се основава на анализа на разпределението на концентрациите на антибиотици, които потискат жизнеспособността на бактериите. Клиничната интерпретация се основава на оценката на ефективността на антибиотичната терапия.
Чувствителни микроорганизми (чувствителни)
Клинично бактериите се класифицират като чувствителни (като се вземат предвид получените параметри ин витро), ако при лечение на инфекции, причинени от тези микроорганизми, със стандартни дози антибиотик се наблюдава добър терапевтичен ефект.
При липса на надеждна клинична информация, разделянето на категории на чувствителност се основава на съвместно отчитане на получените данни ин витро, и фармакокинетиката, т.е. върху концентрациите на антибиотиците, които могат да се постигнат на мястото на инфекцията (или в кръвния серум).
Устойчиви микроорганизми
Бактериите се класифицират като резистентни (резистентни), когато при лечение на инфекция, причинена от тези микроорганизми, няма ефект от терапията дори при използване на максимални дози антибиотици. Такива микроорганизми имат механизми за резистентност.
Микроорганизми с междинна резистентност (междинна)
Клинично се подразбира междинна резистентност при бактериите, когато инфекциите, причинени от такива щамове, могат да имат различни терапевтични резултати. Въпреки това, лечението може да бъде успешно, ако антибиотикът се използва в по-висока от стандартната доза или инфекцията е локализирана в област, където антибактериалното лекарство се натрупва във високи концентрации.
От микробиологична гледна точка бактериите с междинна резистентност включват субпопулация, която в съответствие със стойностите на MIC или диаметрите на зоните е между чувствителни и резистентни микроорганизми. Понякога средно резистентните щамове и резистентните бактерии се комбинират в една категория резистентни микроорганизми.
Трябва да се отбележи, че клиничната интерпретация на бактериалната чувствителност към антибиотици е условна, тъй като резултатът от терапията не винаги зависи само от активността на антибактериалното лекарство срещу патогена. Клиницистите са запознати със случаи, когато микроорганизмите са резистентни, според изследванията ин витро, получи добър клиничен ефект. Обратно, ако патогенът е чувствителен, терапията може да е неефективна.
В определени клинични ситуации, когато резултатите от тестовете за чувствителност по конвенционалните методи са недостатъчни, се определя минималната бактерицидна концентрация.
Минимална бактерицидна концентрация (MBC)- най-ниската концентрация на антибиотика (mg/l или μg/ml), която по време на изследването ин витропричинява смъртта на 99,9% от микроорганизмите от първоначалното ниво за определен период от време.
Стойността на MBC се използва при терапия с антибиотици, които имат бактериостатичен ефект или при липса на ефект от антибактериалната терапия при специална категория пациенти. Специални случаи за определяне на MBC могат да бъдат например бактериален ендокардит, остеомиелит или генерализирани инфекции при пациенти с имунодефицитни състояния.
В заключение бих искал да отбележа, че днес няма методи, които да ни позволят да прогнозираме с абсолютна сигурност клиничния ефект на антибиотиците при лечението на инфекциозни заболявания. Въпреки това, тези резултати за чувствителност могат да служат като добро ръководство за клиницистите при избора и коригирането на антибактериалната терапия.
Таблица 1.Критерии за тълкуване на бактериалната чувствителност
Etest® е инертна пластмасова лента, покрита с антимикробен агент в градиент на концентрация от минимум към максимум, в диапазон, еквивалентен на 15 2-кратни разреждания. От другата страна на лентата има скала на съответните минимални инхибиторни концентрации (MIC). Е-тестовете ви позволяват да определите минималната инхибираща концентрация на антимикробно лекарство (метод на количествена дифузия).
. Инокулирайте блюдо с култура от микроорганизма.
. Поставете Etest® ленти (до 2 на стандартна чаша с диаметър 90 mm или до 6 на чаша с диаметър 180 mm).
. По време на процеса на култивиране около лентата ще се образува елипсоидална зона на инхибиране на растежа, която пресича лентата в точката, съответстваща на MIC.
. Електронните тестове се използват повече от 20 години.
. Повече от 100 антимикробни лекарства.
. Ленти за откриване на мултилекарствена резистентност.
. Определяне на чувствителността на придирчиви микроорганизми, стрептококи, анаеробни микроорганизми, гъби (включително плесени), Mycobacterium tuberculosis и др.
. Удобна форма за освобождаване: 30 или 100 броя, в блистерна опаковка или дунапренен патрон.
| Каталожен номер | |||||
| Индивидуален пакет |
Дунапренов патрон (температура на съхранение +20°С / +4°С) |
(температура на съхранение -20°C) |
|||
| Име | 30 ленти | 100 ленти | 30 ленти | 100 ленти | 30 ленти |
| противогъбични | |||||
| Е-тест Амфотерицин | 526318 | 526310 | |||
| Е-тест Анидулафунгин | 532008 | 532000 | |||
| Е-тест Вориконазол | 532818 | 532810 | |||
| Е-тест Итраконазол | 412380 | 525818 | 525810 | ||
| Е-тест Каспофунгин | 412269 | 532418 | 532410 | ||
| Е-тест Кетоконазол | 525918 | 525910 | |||
| Е-тест Микафунгин | 535708 | 535700 | |||
| Е-тест Posaconazole | 532118 | 532110 | |||
| Е-тест Флуконазол | 412350 | 510818 | 510810 | ||
| Е-тест Flucytosine | 510918 | 510910 | |||
| Противотуберкулозни | |||||
| Е-тест Изониазид | 527900 | ||||
| Е-тест Етамбутол | 527700 | ||||
| Е-тест Етионамид | 527500 | ||||
| Антибактериално | |||||
| Е-тест Азитромицин | 412251 | 501618 | |||
| Е-тест Aztreonam | 412259 | 501718 | 501710 | ||
| Е-тест Амикацин | 412219 | 501318 | |||
| Е-тест Амоксицилин | 412243 | 500918 | |||
| Е-тест Амоксицилин/клавуланова киселина (2/1) | 412241 | 501018 | 501010 | ||
| Е-тест Ампицилин | 412253 | 501518 | |||
| Е-тест Ампицилин/сулбактам (2/1) | 412251* | 501818 | 501810 | ||
| Е-тест Бацитрацин | 528608 | 528600 | |||
| Е-тест Бензилпеницилин (висока концентрация) | 412263 | 502518 | |||
| Е-тест Бензилпеницилин (ниска концентрация) | 412265 | 502618 | |||
| Е-тест Ванкомицин | 412488 | 525518 | |||
| Е-тест Gatifloxacin | 530218 | 530210 | |||
| Е-тест Гентамицин (висока концентрация) | 512708 | 512700 | |||
| Е-тест Гентамицин (ниска концентрация) | 412368 | 512518 | |||
| Е-тест Даптомицин | 412324 | 535018 | 535010 | ||
| Е-тест Доксициклин | 412328*** | 509718 | 509710 | ||
| Е-тест Doripenem | 412326*** | 535918 | 535910 | ||
| Е-тест Имипенем | 412374 | 513618 | |||
| Е-тест Канамицин | 527818 | 527810 | |||
| Е-тест Кларитромицин | 508718 | 508710 | |||
| Е-тест Клиндамицин | 412315 | 509518 | |||
| Е-тест Колистин | 412317** | 537308 | 537300 | ||
| Е-тест Левофлоксацин | 412393 | 527418 | |||
| Е-тест Линезолид | 412396 | 531318 | |||
| Е-тест Меропенем | 412402 | 513818 | |||
| Е-тест Метронидазол | 412404 | 530018 | |||
| Е-тест Mecillinam | 513708 | 513700 | |||
| Е-тест Миноциклин | 412409*** | 516018 | 516010 | ||
| Е-тест Моксифлоксацин | 412411** | 529018 | 529010 | ||
| Е-тест Мупироцин | 412417*** | 413496 | 516300 | ||
| Е-тест Налидиксова киселина | 516508 | 516500 | |||
| Е-тест Нетилмицин | 517518 | 517510 | |||
| Е-тест Нитрофурантоин | 412426*** | 530408 | 530400 | ||
| Е-тест Norfloclacin | 412428** | 519508 | 519500 | ||
| Е-тест Оксацилин | 412432 | 520518 | |||
| Е-тест Офлоксацин | 519618 | 519610 | |||
| Е-тест Пиперацилин | 521518 | 521510 | |||
| Е-тест Пиперацилин/тазобактам (4 µg/ml) | 412434 | 521418 | |||
| Е-тест Полимиксин | 533408 | 533400 | |||
| Е-тест Рифампицин | 412450 | 526018 | 526010 | ||
| Е-тест Спектиномицин | 529218 | 529210 | |||
| Е-тест Стрептомицин | 412454 | 526808 | 526800 | ||
| Е-тест Сулфаметоксазол | 534118 | 534110 | |||
| Е-тест Teicoplanin | 412461 | 522018 | |||
| Е-тест Тетрациклин | 412471 | 522518 | |||
| Е-тест Tigecycline | 412475 | 533518 | |||
| Е-тест Тикарцилин/клавуланова киселина | 522618 | 522610 | |||
| Е-тест Тобрамицин (висока концентрация) | 533108 | 533100 | |||
| Е-тест Тобрамицин (ниска концентрация) | 522718 | 522710 | |||
| Триметоприм E-тест | 523618 | 523610 | |||
| Е-тест триметоприм/сулфаметоксазол (1/16) | 412481 | 524418 | |||
| Е-тест Фосфомицин | 529108 | 529100 | |||
| Е-тест Фузидова киселина | 511518 | 511510 | |||
| Е-тест Quinupristin/dalfopristin | 528718 | 528710 | |||
| Е-тест Хлорамфеникол | 412309 | 507518 | 507510 | ||
| Е-тест Цефаклор | 504518 | 504510 | |||
| Е-тест Цефалотин | 412307 | 503518 | 503510 | ||
| Е-тест Цефепим | 412273 | 505018 | 505010 | ||
| Е-тест Цефиксим | 412275 | 529918 | 529910 | ||
| Е-тест Цефокситин | 412285 | 506518 | 506510 | ||
| Е-тест Цефоперазон/сулбактам (2/1) | 529318 | 529310 | |||
| Е-тест Цефотаксим (висока концентрация) | 412279 | 505518 | |||
| Е-тест Цефотаксим (ниска концентрация) | 412281 | 505618 | |||
| Е-тест Cefotetan | 506308 | 506300 | |||
| Електронен тест с Cefpir | 506408 | 506400 | |||
| Е-тест Цефподоксим | 505818 | 505810 | |||
| Е-тест Цефтазидим | 412293 | 506718 | |||
| Е-тест Цефтаролин | 412291 | ||||
| Е-тест Цефтизоксим | 527308 | 527300 | |||
| Е-тест Цефтобипрол | 412297 | ||||
| Е-тест Цефтриаксон (висока концентрация) | 412301 | 506618 | 506700 | ||
| Е-тест Цефтриаксон (ниска концентрация) | 412303 | 507018 | 507000 | ||
| Е-тест Цефуроксим | 506918 | 506910 | |||
| Е-тест Ципрофлоксацин | 412311 | 508618 | |||
| Е-тест Енрофлоксацин | 528908 | 528900 | |||
| Е-тест Еритромицин | 412334 | 510518 | |||
| Е-тест Ертапенем | 412332 | 531618 | 531610 | ||
| Номер по каталог |
|||
| Индивидуален пакет |
Пластмасови секционни опаковки (температура на съхранение -20°C) |
||
| Име | 30 ленти | 100 ленти | 30 ленти |
| Определяне на мултилекарствена резистентност | |||
| Е-тест Цефотаксим / Цефотаксим + клавуланова киселина (4 μg/ml) |
412336** | 532208 | 532200 |
| Е-тест Ceftazidime / Ceftazidime + clavulanic acid (4 μg/ml) Проектиран да определи наличието на бета-лактамазни ензими с разширен спектър (ESBL), инхибирани от клавуланова киселина в грам-отрицателни бактерии, включително Klebsiella spp., Escherichia coli, Proteus mirabilis, други членове на семейството Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412340** | 532508 | 532500 |
| Е-тест Цефепим / Цефепим + клавуланова киселина (4 μg/ml) Проектиран да определи наличието на бета-лактамазни ензими с разширен спектър (ESBL), инхибирани от клавуланова киселина в грам-отрицателни бактерии, включително Klebsiella spp., Escherichia coli, Proteus mirabilis, други членове на семейството Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412338** | 534708 | 534700 |
| Е-тест Imipenem / Imipenem + EDTA Предназначен за определяне на наличието на метало-бета-лактамазни ензими в грам-отрицателни бактерии, включително Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. | 534208 | 534200 | |
| Е-тест Ванкомицин / Тейкопланин Предназначен за определяне на резистентност (или умерена резистентност) към гликопептиди на грам-положителни бактерии, включително Staphylococcus aureus, Enterococcus spp. |
537208 | 537200 | |
| Е-тест Цефотетан / Цефотетан + клаксацилин Проектиран да определя наличието на ензими AmpC-бета-лактамаза в грам-отрицателни бактерии |
537108 | 537100 | |
В тази част ще разгледаме тестването от край до край (E2E): ще тестваме цялото приложение и ще го направим от гледна точка на потребителя, по същество автоматизирайки всички негови действия.
В нашия случай приложението се състои само от фронтенд - просто няма бекенд, така че E2E тестването ще се състои от отваряне на приложението в реален браузър, извършване на набор от изчисления и проверка на валидността на стойността на екрана.
Трябва ли да проверяваме всички пермутации, както направихме в единични тестове? Не, защото това вече е проверено! В E2E тестовете ние проверяваме производителността не на отделни единици, а на цялата система наведнъж.
Колко E2E теста са необходими?
Първата причина, поради която не трябва да има много такива тестове, е, че трябва да са достатъчни добре написани интеграционни и модулни тестове. E2E тестовете трябва да проверят дали всички елементи са правилно свързани помежду си.
Втората причина е, че са бавни. Ако има сто от тях, като модулни и интеграционни тестове, тогава ще се проведе тестване Многоза дълго време.
Третата причина е непредвидимото поведение на E2E тестовете. Има публикация за този феномен в блога за тестване на Google. Единичните тестове не показват този вид нестабилно поведение. Те могат да преминат или да паднат - и без видими промени, единствено поради I / O. Възможно ли е да се премахне непредсказуемостта? Не, но можете да го минимизирате.
За да елиминирате непредвидимостта, правете възможно най-малко E2E тестове. Напишете един E2E тест за десет други и то само когато са наистина необходими.
Писане на E2E тестове
Нека да преминем към писане на E2E тестове. Имаме нужда от две неща: браузър и сървър за нашия фронтенд код.
Първо, нека да разгледаме настройката на уеб сървър.
Настройване на уеб сървър в Mocha
Уеб сървър на Node? Express веднага идва на ум, нека да разгледаме кода:
Let server before((done) => ( const app = express() app.use("/", express.static(path.resolve(__dirname, "../../dist") server = app. listen(8080, done) )) after(() => ( server.close() ))
Във функцията before създаваме експресно приложение, насочваме го към папката dist и го настройваме да слуша на порт 8080. Във функцията after ние „убиваме“ сървъра.
Папката dist е мястото, където съхраняваме нашите JS скриптове и където копираме нашите HTML и CSS файлове. Можете да видите, че правим това в скрипта за изграждане на npm в package.json:
( "name": "frontend-testing", "scripts": ( "build": "webpack && cp public/* dist", "test": "mocha "test/**/test-*.js" && eslint тестова библиотека", ...),
Това означава, че за E2E тестове трябва първо да изпълните npm run build и след това npm test. Да, неудобно е. В случай на модулни тестове това не е необходимо, тъй като те се изпълняват под Node и не изискват превод и асемблиране.
За пълнота, нека да разгледаме webpack.config.js, който описва как Webpack трябва да прави изграждането на файлове:
Module.exports = ( запис: "./lib/app.js", изход: ( име на файл: "bundle.js", път: path.resolve(__dirname, "dist")), ...)
Папката dist се използва както в потребителската среда, така и в E2E тестове. Това е важно - трябва да стартирате E2E тестове в среди, които са възможно най-подобни на "бойни" среди.
Настройки на браузъра в Mocha
Приложението ни е инсталирано на сървъра - остава само да стартираме браузъра за него. Коя библиотека ще използваме за автоматизация? Обикновено използвам популярния selenium-webdriver.
Първо, нека да разгледаме как го използваме, преди да влезем в настройките:
Const (prepareDriver, cleanupDriver) = require("../utils/browser-automation") //... describe("calculator app", function () ( let driver ... before(async () => ( driver = изчакване на подготовкаDriver() )) след(() => cleanupDriver(драйвер)) it("трябва да работи", async функция () ( изчакване на driver.get("http://localhost:8080") //... )))
Във функцията преди подготвяме драйвера, а във функцията след го почистваме. Подготовката на драйвера ще стартира браузъра, а изчистването ще го затвори. Обърнете внимание, че настройването на драйвера става асинхронно и можем да използваме async/await, за да направим кода по-красив.
В тестовата функция отваряме адреса http://localhost:8080, като отново използваме await, като се има предвид, че driver.get е асинхронна функция.
И така, как изглеждат repeatDriver и cleanupDriver?
Const webdriver = require("selenium-webdriver") const chromeDriver = require("chromedriver") const path = require("path") const chromeDriverPathAddition = `:$(path.dirname(chromeDriver.path))` exports.prepareDriver = async () => ( process.on("beforeExit", () => this.browser && this.browser.quit()) process.env.PATH += chromeDriverPathAddition return await new webdriver.Builder() .disableEnvironmentOverrides() .forBrowser("chrome") .setLoggingPrefs((браузър: "ALL", драйвер: "ALL")) .build() ) exports.cleanupDriver = async (драйвер) => ( if (драйвер) ( driver.quit() ) process.env.PATH = process.env.PATH.replace(chromeDriverPathAddition, "") )
Това е сложно нещо. И трябва да призная нещо: този код е написан с кръв (о, и работи само на Unix системи). Той е написан с помощта на Google, Stack Overflow и документация на уебдрайвер и е силно модифициран от научни изследвания. Но работи!
На теория можете просто да копирате и поставите кода във вашите тестове, без да го разбирате, но нека го разгледаме за секунда.
Първите два реда свързват webdriver - драйвер за браузъра. Начинът, по който работи Selenium Webdriver, е, че има API (в модула selenium-webdriver, който импортираме на ред 1), който работи с всеки браузър и разчита на драйвери на браузъра за... управление различни браузъри. Драйверът, който използвах, е chromedriver, импортиран на линия 2.
Драйверът на Chrome не се нуждае от браузър на машината: той всъщност инсталира свой собствен изпълним файл файл на Chromeкогато инсталирате npm. За съжаление, по някаква причина, която не мога да разбера, не може да го намери и директорията chromedriver трябва да се добави към PATH (това е точно това, което не работи в Windows). Правим това на ред 9. Също така го премахваме от PATH по време на стъпката за почистване, на ред 22.
И така, конфигурирахме драйвера на браузъра. Сега е време да конфигурираме (и върнем) уеб драйвера, което правим на редове 11-15. И тъй като функцията за изграждане е асинхронна и връща, ние я чакаме с помощта на await.
Защо правим това в редове 11–15? Причините се крият в мъглата на опита. Чувствайте се свободни да копирате и поставяте - няма гаранции, но използвах този код известно време и нямах проблеми.
Да започнем тестването
Приключихме с настройката - време е да разгледаме кода, който webdriver използва за управление на браузъра и да тестваме нашия код.
Класификация, общи подходи за изпълнение. Дифузионни методи: метод на хартиен диск, Е-тест.Методите за определяне на чувствителността на бактериите към антибиотици са разделени на 2 групи:
1. Дифузионни методи:
. използване на антибиотични дискове
. с помощта на електронни тестове
2. Методи за серийно разреждане:
. разреждане в течна хранителна среда (бульон)
. разреждане в агарна среда
Методите за определяне на чувствителността са разработени през втората половина на 60-те - началото на 70-те години на 20 век и оттогава не са претърпели фундаментални промени от методологична гледна точка.
Следните стъпки са общи за всички методи:
- подготовка и контрол на качеството на хранителните среди
- приготвяне на суспензия от тестови микроорганизми (инокулум)
- инокулация
- за дифузионни методи - етапът на нанасяне на Е-тест дискове или ленти върху твърда хранителна среда.
- инкубация
- записване и интерпретация на резултатите
- формулиране на препоръки за лечение
Дифузионните методи се основават на дифузия на антибактериално лекарство (ABP) от носител в твърда хранителна среда, инокулирана с микроорганизъм, и записване на диаметъра на зоната на инхибиране (забавяне) на растежа на изследвания микроорганизъм.
. Методът е по-малко чувствителен и по-малко точен от метода на серийно разреждане, но се използва по-често на практика поради своята простота. Публикувано на реф.рф.
. Скоростта на дифузия на всяко лекарство в агар зависи от неговата структура, молекулно тегло, наличие на примеси, състав и рН на средата.
Метод на хартиени дискове с антибиотик (дисково дифузионен метод).
. За да изпълните този метод, използвайте стандартни колела, съдържащ определено количество антибиотици, и стандартна хранителна среда, необходима за растежа на този вид микроорганизми. В определени граници диаметърът на зоната на инхибиране на растежа е обратно пропорционален на MIC. . Бактериална суспензия с определена плътност се нанася върху повърхността на агара в петриево блюдо. . Поставят се дискове, съдържащи определено количество антибиотик. . Инкубирайте при условия, благоприятни за всеки конкретен микроорганизъм. . Диаметрите на зоните на инхибиране на растежа около диска се измерват в милиметри (като се вземе предвид диаметърът на диска). . Резултатът се оценява с помощта на специална таблица чрез сравняване на диаметъра на зоните на инхибиране на растежа на тестваната култура с граничните стойности на диаметъра на зоната в таблицата. . Изследваната култура се класифицира в една от трите категории: чувствителна, умерено чувствителна и устойчива. 
Е-тест (Е-тест или епсилометричен метод)
Методът е близък по технология до метода на хартиения диск.
. Като носител се използва тясна лента от полимер (0.5x6.0 cm), върху която се прилага градиент на концентрациите на ABP (от минимум към максимум). Стойностите на концентрацията на ABP във всяка секция на лентата са маркирани върху външната (с лице към изследователя) повърхност.
. Инхибирането на растежа на микроорганизмите около лентата на носителя възниква в зоната, където концентрацията на антибиотик, дифундиращ от носителя, е по-висока от MIC.
. В пресечната точка на елипсоидалната зона на инхибиране на растежа с Е-тест лентата се получава стойността на MIC.
Е-тестът съчетава простотата на метода на хартиения диск с точността на метода на серийното разреждане. 
Методи, използвани за сравнителна in vitro оценка на лекарства за антимикробна терапия: метод на серийни разреждания в течни и твърди хранителни среди.
Методи за серийно разреждане:
. Те позволяват да се определи количествено чувствителността на изолирания микроорганизъм към антибактериални средства и да се определи MIC на лекарството.
. Използва се за сравнителна оценка на in vitro антимикробната активност на разработваното генерично лекарство и оригиналното лекарство.
. За да се определи стойността на MIC, определени концентрации на антибиотици се добавят към хранителната среда, която след това се инокулира с култура от изследвания микроорганизъм. След инкубацията се оценява наличието или липсата на видим растеж.
. Въз основа на използването на двукратни серийни разреждания на концентрациите на ABP от максимум до минимум (например от 128 μg/ml, 64 μg/ml и т.н. до 0,5 μg/ml, 0,25 μg/ml и 0,125 μg/ml) .
. Провеждат се в течни и агарови хранителни среди. Метод на серийни разреждания в течна хранителна среда (бульон)
Има 2 опции за този метод:
макрометод (епруветка) и микрометод (плака).
Макро метод.
. Тестването се извършва в епруветки в краен обем от 1 ml за всяко разреждане.
. Хранителният бульон се налива в 0,5 ml във всяка епруветка. Броят на епруветките се определя от необходимия диапазон на разреждане на ABP.
. Приготвяне на суспензия от изследваните микроорганизми:
- Работна суспензия (~ 10 6 CFU/ml) се приготвя от стандартна суспензия на всеки изследван микроорганизъм (~ 10 8 CFU/ml). Приготвяне на двукратни серийни разреждания на ABP: - пригответе изходен разтвор на ABP на тестваното генерично лекарство и референтното лекарство (оригинал) в концентрация от 1000 μg/ml и по-висока (като се вземе предвид съдържанието на активното вещество) . - от основните разтвори на ABP на изследваното генерично лекарство и референтното лекарство (оригинал), работните разтвори на ABP се приготвят с помощта на течна хранителна среда. (Концентрацията на работните разтвори се изчислява въз основа на необходимата максимална концентрация в серия от серийни разреждания, като се взема предвид факторът на разреждане при последващо инокулиране със суспензия от микроорганизма) - приготвят се серийни разреждания: 0,5 ml от работния разтвор на ABP се добавя към първата епруветка, съдържаща 0,5 ml бульон. Разбъркайте. С помощта на нова пипета (накрайник) прехвърлете 0,5 ml разтвор на ABP в бульон във втора епруветка, съдържаща 0,5 ml бульон и т.н., докато всички задължителен редразреждания. От последната епруветка се изваждат 0,5 ml. Така се получава поредица от епруветки с разтвори на АБП, чиито концентрации се различават в съседните епруветки 2 пъти. Инокулация: 0,5 ml микробна суспензия с концентрация на микроорганизми ~ 10 6 се добавя към всяка епруветка с 0,5 ml подходящо разреждане на ABP. Крайната концентрация на микроорганизма във всяка епруветка е ~ 5x10 5 CFU/ml. . Контрола - епруветка с бульон и култура от микроорганизми (контрол на растежа). Отрицателна контрола - епруветка с бульон (контрол за стерилност). . Инкубация: Всички епруветки, запечатани със запушалки или капачки, се инкубират при условия, които осигуряват растеж на тестовите микроорганизми. . Записване и тълкуване на резултатите: епруветките с култури се разглеждат в пропускаща светлина. Растежът на културата в епруветката с ABP се сравнява с контролната епруветка. - наличието на растеж на микроорганизми в бульона (помътняване на бульона) показва, че тази концентрация на антибиотика е недостатъчна, за да потисне неговата жизнеспособност. - с увеличаване на концентрацията на антибиотика растежът на микроорганизма се влошава. Първата най-ниска концентрация на антибиотика (от серия от серийни разреждания), при която бактериалният растеж не се определя визуално, се счита за минимална инхибираща концентрация (MIC). лекарства за антибактериална терапия - сравнете резултатите, получени за оригиналното лекарство и изследваното генерично лекарство. Прави се заключение за тяхната еквивалентност по отношение на спектъра (списък на използваните микроорганизми) и степента на антимикробна активност (стойности на MIC). 
. Определяне на MBC: от последните няколко епруветки със забавяне на растежа, инокулирайте с примка върху секторите на петриево блюдо. MBC, който обикновено е с няколко разреждания по-малък от MIC, се приема за концентрация на лекарството в последната епруветка, от която не е получен растеж. . Недостатък на метода: ниска производителност - приложението е ограничено до изследвания на малък брой микроорганизми.
Микрометод
.Процедурата на теста е подобна на тази при използване на макрометода
.Окончателният обем е до 0,2 ml Наличие на подходящо лабораторно оборудване: 96-ямкова плака със стерилни капаци, многоканални пипети могат да се добавят предварително в ямките на плаката и след това да се съхраняват запечатани в полиетилен при температура под 60°C до момента на употреба. . Предимства на метода: - висока производителност- възможност за дългосрочно съхранение на предварително приготвени таблетки - спестявания консумативи. Публикувано на реф.рф
Метод на серийни разреждания в агарна среда. Принципът на теста е подобен на метода за разреждане на бульона. Приготвяне на суспензия от тестови микроорганизми: - стандартна суспензия от всеки тестов микроорганизъм трябва да съдържа ~ 10 8 CFU/ml. - стандартната микробна суспензия за експеримента се разрежда ~ 10 пъти, за да се получи концентрация на микроорганизъм от ~ 10 7 CFU/ml. Приготвянето на двукратни серийни разреждания на ABP за оригиналното лекарство и изследваното генерично лекарство се извършва подобно на метода на разреждания в бульон. Агаровата среда се разтопява и охлажда до температура 45-50°C. . Приготвяне на блюда с агарна среда и разреждания на ABP: смесете агаровата среда и разтворите на ABP директно в петриево блюдо (за пластмасови блюда с диаметър 90 mm добавете 18 ml разтопен и охладен агар към 2 ml разтвор на ABP). . Инокулация и инкубация: използва се бактериологична примка за прехвърляне на 1-2 μl от суспензията на изследваните микроорганизми върху повърхността на агаровата среда. Така крайната доза на инокулума е ~10 4 CFU (стандартна бактериологична бримка с диаметър 3 mm носи 1-2 µl течност). . На повърхността на агара се образува петно с диаметър 5-8 mm. След изсушаване съдовете се обръщат и се инкубират при условия, благоприятни за развитието на изследваните микроорганизми. . Записване и тълкуване на резултатите: подобно на метода за разреждане на бульона. Петриевите блюда се поставят върху тъмна, неотразяваща повърхност. Концентрацията на ABP, която причинява пълно инхибиране на видимия растеж, се приема като MIC. . Контрол: агарови плаки, инокулирани със суспензия от култури на микроорганизми без ABP (контрол на растежа). Отрицателна контрола: агарови плаки (контрол на стерилност). Предимства на метода: на една плака може да се определи чувствителността на няколко микроорганизма.
Обхват на изследването на сравнителната оценка на in vitro антимикробната активност за генерични и оригинални антимикробни средства.
Обхват на изследването за сравнителната оценка на in vitro антимикробната активност на генерични антимикробни лекарства:
.Цел на изследването: потвърждаване на съответствието на генеричното лекарство с референтния (оригинален) по отношение на спектър (микроорганизми) и степен (MIC, MBC стойност) на антимикробна активност.
.Набор от изследвани микроорганизми: 1-2 щама от всеки микроорганизъм, включен в спектъра на действие
- щамове за референтна колекция
- клинични щамове, изолирани в болници
.Определят се стойностите на MIC и MBC
.Контрол: референтно лекарство - оригинално лекарство
.Очакван резултат: MIC и MBC на разработените генерични антимикробни лекарства са в допустимите граници на стойности и напълно съвпадат с MIC и MBC на референтните лекарства (оригинални лекарства) по отношение на колекцията и клиничните щамове.
Процедурата за изследвания за определяне in vitro антимикробна активност на нови антимикробни съединения:
.Първична оценка на чувствителността към нови съединения на референтни щамове на различни видове грам-отрицателни и грам-положителни микроорганизми (4-5 щама за всеки вид);
.Подробно изследване на степента на антибактериална активност на съединения срещу щамове на грам-отрицателни и грам-положителни микроорганизми от международни колекции с известни механизми на резистентност (метод на серийно разреждане);
.Изследване на активността срещу клинични щамове на опортюнистични и патогенни микроорганизми в сравнение с известни лекарства от подобна химична група или подобни по антимикробен ефект:
- при преобладаваща активност срещу грам-положителни микроорганизми, контрол - естествени пеницилини, цефалоспорини от първо и второ поколение, макролиди, линкозамиди; - за активност срещу грам-отрицателни микроорганизми, контрола - полимиксин В, азтреонам; - за широкоспектърни лекарства, контрол - полусинтетични пеницилини, аминогликозиди, тетрациклини, цефалоспорини от III - IV поколения
. Оценка на антимикробната активност срещу проблемни патогени: метицилин-резистентни стафилококи, бензилпеницилин-резистентни Streptococcus pneumonia, мултирезистентни enterobacteriaceae, резистентни към аминогликозиди бактерии от рода Pseudomonas и др.
.Началните терапевтични концентрации на нови лекарства се установяват, като се вземе предвид токсичността, определена в експерименти за изследване на острата токсичност;
. Сравнителната степен на антибактериална активност на лекарствата се оценява чрез стойността на MIC или MBC, определена при не по-малко от 2 стойности на дозата на семена: минимум - 10 4 - 10 5 CFU / ml и максимум - 10 6 - 10 9 CFU /ml, в зависимост от вида на патогена; Към днешна дата няма методи, които да ни позволят да прогнозираме с абсолютна сигурност клиничния ефект на антибиотиците при лечението на инфекциозни заболявания. Въпреки това, тези резултати за чувствителност могат да служат като добро ръководство за клиницистите при избора и коригирането на антибактериалната терапия.
Съдържание на книгата отваряне затваряне
1. Фармацевтична микробиология. Предмет и задачи на фармацевтичната микробиология.
2. Фармация и фармацевтика: история на възникване и развитие.
3. Медицина: определение, класификация.
4. Състав на лекарства | фармацевтично вещество, ексципиент.
5. Оригинални и генерични лекарства. Име на лекарствата.
10. Действие на увреждащите фактори върху микроорганизмите. Влиянието на температурния фактор и използването му във фармацевтиката.
11. Действие на радиацията върху микроорганизмите, видове радиация.
12. Влияние на химичните увреждащи фактори върху микроорганизмите
13. Стерилизация. Ниво на гарантиране на стерилност (SAL). Критерии за избор на метод за стерилизация.
14. Термична и химична стерилизация
15. Контрол на ефективността на стерилизиращите устройства.
16. Промишлена дезинфекция
17. Дезинфектанти и антисептици. Изисквания към химическите дезинфектанти и антисептици.
18. Консерванти и тяхното приложение във фармацевтичното производство
