تعیین حساسیت به آمپر. روش های جدید برای تعیین حساسیت باکتری ها به داروهای شیمی درمانی

روش انتشار دیسک

بیش از 6 دیسک آغشته به آنتی بیوتیک روی سطح یک محیط مغذی متراکم کاشته شده روی یک چمن پیوسته با محصول مورد مطالعه، در فاصله حداقل 2 سانتی متری از یکدیگر قرار داده می شود. نتایج پس از 18-24 ساعت انکوباسیون در یک ترموستات با توجه به قطر منطقه بدون رشد اطراف دیسک با آنتی بیوتیک ثبت می شود. وجود رشد در اطراف دیسک نشان دهنده عدم حساسیت این میکروب به آنتی بیوتیک است. برای تفسیر نتایج از جداول خاصی استفاده می شود.

شکل 1. تعیین حساسیت

میکروارگانیسم ها با استفاده از روش انتشار دیسک:

1- میکروارگانیسم حساسبه یک آنتی بیوتیک؛

2- میکروارگانیسم نسبتا مقاومبه یک آنتی بیوتیک؛

3- میکروارگانیسم پایداربه یک آنتی بیوتیک

روش آزمون الکترونیکی

اصل روش. تعیین حساسیت یک میکروارگانیسم مشابه آزمایش با روش انتشار دیسک انجام می شود. تفاوت این است که به جای دیسک آنتی بیوتیک، از نوار تست E که حاوی گرادیان غلظت آنتی بیوتیک از حداکثر به حداقل است استفاده می شود. در تقاطع ناحیه بیضی شکل مهار رشد با نوار تست E، مقدار حداقل غلظت بازدارنده (MIC) به دست می آید.

شکل 2. تعیین حساسیت میکروارگانیسم ها با استفاده از آزمون E

روش رقت سریال در محیط آبگوشت

در لوله‌های آزمایش حاوی 1 میلی‌لیتر براث مولر-هینتون، رقت‌های متوالی دو برابری از داروی ضدباکتری تهیه کنید، مثلاً 100 میکروگرم در میلی‌لیتر - اول، 50 میکروگرم در میلی‌لیتر - دوم، 25 میکروگرم در میلی‌لیتر - سوم، 12.5 میکروگرم در میلی‌لیتر. - چهارم و غیره سپس 0.1 میلی لیتر از سوسپانسیون باکتریایی آزمایش شده به هر لوله اضافه می شود. در همان زمان، کنترل رشد (1 میلی لیتر براث مولر-هینتون و 0.1 میلی لیتر سوسپانسیون باکتریایی) تجویز می شود. محصولات در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 18-24 ساعت انکوبه می شوند و پس از آن نتایج یادداشت می شود. عدم وجود کدورت در محیط نشان دهنده تاخیر در رشد باکتری در حضور غلظت معین دارو است.

شکل 3. تعیین مقدار MIC با رقیق سازی در یک محیط غذایی مایع

حداقل غلظت مهاری (MIC) کمترین غلظت یک آنتی بیوتیک (به میکروگرم در میلی لیتر یا میلی گرم در لیتر) است که رشد باکتری قابل مشاهده در شرایط آزمایشگاهی را کاملاً مهار می کند.

2 تعیین حساسیت سویه های مختلف استافیلوکوک به آنتی بیوتیک ها با استفاده از روش استاندارد دیسک

آنتی بیوتیک	منطقه مهار رشد، میلی متر	ویژگی های کرنش

فرهنگ مورد مطالعه به _________________________________________________ حساس است

نسبتاً مقاوم به ________________________________________________________________________________،

مقاوم به _________________________________________________________________________________.

3 تعیین حداقل غلظت مهاری (MIC) پنی سیلین با روش رقت های سریال.

نتیجه: MIC پنی سیلین برای سویه مورد مطالعه ________________________________________________

مزایای روش: ________________________________________________________________________________

معایب روش:________________________________________________________________________________

4 شناسایی و ثبت اثرات آنتاگونیستی انواع مختلف باکتری.

یک میکروب آنتاگونیست و سویه های آزمایشی عمود بر آن با رگه ای در امتداد قطر بر روی صفحه ای با MPA تلقیح می شوند. نتایج یک روز پس از کاشت ثبت می شود. حضور و درجه اثر آنتاگونیستی با اندازه مناطق بازدارنده رشد کشت های آزمایش تعیین می شود.

کاشت خط ________________________________

نتیجه:بیشترین اثر آنتاگونیستی برای سویه های آزمایشی (نوع ها را مشخص کنید) تشخیص داده شد ________________________________________________________________________________________________

درس شماره 8

موضوع:درس پایانی با موضوع: "مراحل تاریخی در توسعه میکروب شناسی، مورفولوژی، فیزیولوژی و ژنتیک میکروارگانیسم ها."

شکل ها و اندازه های باکتری های واقعی ویژگی های اشکال کروی، میله ای شکل و پیچ خورده باکتری های واقعی.

ساختار باکتری ها تفاوت های اصلی بین یک سلول پروکاریوتی و یک سلول یوکاریوتی.

دیواره سلولی باکتری های گرم مثبت و گرم منفی.

انواع آماده سازی میکروسکوپی. تکنیک تهیه آماده سازی ثابت.

تکنیک میکروسکوپ در میکروسکوپ نوری بررسی مورفولوژی میکروارگانیسم ها در میکروسکوپ الکترونی.

خواص رنگی میکروب ها رنگ ها روش های ساده رنگ آمیزی آماده سازی ثابت.

اصول طبقه بندی پروکاریوت های بیماری زا (Burgee, 2001).

وسایل حفاظتی در میکروارگانیسم ها هاگ ها، مراحل و شرایط تشکیل هاگ، اهمیت بیولوژیکی.

کپسول های باکتریایی، معنای آنها.

تاژک، ساختار آنها. سیلیا. نوشیدن جنسی.

روش های پیچیده نقاشی تکنیک های رنگ آمیزی گرم، زیهل-نیلسن، بوری-جین، نایسر.

روش های مطالعه میکروارگانیسم ها در حالت زنده تست CON. اصل روش.

اسپیروکت ها. موقعیت سیستماتیک و مورفولوژی اسپیروکت ها. ویژگی های فراساختار و ترکیب شیمیایی. روش های پژوهش.

اکتینومیست ها، مورفولوژی، فراساختار، ترکیب شیمیایی. گونه های بیماری زا نقش اکتینومیست ها در طبیعت و پزشکی. روش های تشخیص

تاکسونومی کلامیدیا مورفولوژی، ساختار، روش های تشخیص. چرخه رشد کلامیدیا

ریکتزیا، مورفولوژی، فراساختار، ترکیب شیمیایی. گونه های بیماری زا

مایکوپلاسماها طبقه بندی. فیلوژنز. روش های تشخیص

اشکال معیوب میکروب ها: پروتوپلاست، کروپلاست، شکل L.

تغذیه باکتری ها مواد مغذی منابع کربن و نیتروژن هستند. طبقه بندی باکتری ها بر اساس نوع تغذیه اتوتروف ها و کمو ارگانوتروف ها

عوامل رشد و منابع آنها منابع عناصر معدنی

روش ها و مکانیسم های انتقال مواد مغذی از طریق غشا.

انرژی مورد نیاز باکتری ها راههای دریافت انرژی از اتوتروف ها (فتوسنتز، کموسنتز). منابع و راه‌های کسب انرژی در شیمی‌ارگانوتروف‌ها.

انواع هوازی و بی هوازی اکسیداسیون بیولوژیکی در باکتری ها. باکتری های هوازی، بی هوازی، بی هوازی اختیاری و میکروآئروفیل. روش های ایجاد شرایط بی هوازی

اهداف، مراحل، مزایا و معایب روش تحقیق باکتریولوژیک (فرهنگی).

رشد و تولید مثل میکروارگانیسم ها. روش های تولید مثل مکانیزم شکافت دودویی (ساده). تولید مثل جمعیت های باکتریایی

اصول و روش های کشت باکتری. نیازهای تغذیه ای میکروب ها

محیط های غذایی برای کشت باکتری ها. الزامات برای محیط های غذایی طبقه بندی محیط های غذایی

شرایط و تکنیک های کشت باکتری. تکنیک کاشت روی محیط های غذایی الگوها و ماهیت رشد باکتری در محیط های غذایی جامد و مایع

روش های جداسازی کشت خالص باکتری های هوازی و بی هوازی

خواص میکروارگانیسم های مورد استفاده برای شناسایی کشت های جدا شده

آنزیم های باکتریایی، طبقه بندی. روش های مطالعه خواص بیوشیمیایی میکروارگانیسم ها. استفاده عملی از فعالیت بیوشیمیایی در شناسایی باکتری

تعیین خواص ساکارولیتیک، ترکیب محیط کشت Hiss. تعیین خواص پروتئولیتیک، تعیین فعالیت کاتالاز و اکسیداز.

اصل عملکرد و ویژگی های استفاده از دستگاه ها برای شناسایی خودکار کشت های باکتریایی (هموکلتیواتور، آنالایزر خودکار).

ویژگی های کشت ریکتزیا و کلامیدیا.

باکتریوفاژها (فاژها). تاریخچه کشف. مورفولوژی، ویژگی های ساختاری، ترکیب شیمیایی و خواص فاژها.

فاژهای ویروسی مراحل تعامل با یک سلول باکتری نتایج تعامل بین فاژ و سلول. فاژهای معتدل پروفاژ. پدیده لیزوژنی. تبدیل فاژ.

روش های جداسازی و تیتراسیون باکتریوفاژها بر روی محیط های غذایی جامد و مایع کاربرد فاژها در میکروبیولوژی و پزشکی. تشخیص فاژ و تایپ فاژ.

وراثت سازماندهی دستگاه ژنتیکی در باکتری ها (نوکلوئید، پلاسمیدها،است

- توالی ها، ترانسپوزون ها).

اصول عملکرد ژنوم باکتری. سازماندهی اپرون ژنوتیپ و فنوتیپ.

پلاسمیدها، طبقه بندی، ساختار و خواص پلاسمیدها. پلاسمید R، ویژگی های ساختار و عملکرد. پلاسمیدهای باکتریوسینوژن

تنوع میکروبی تغییرات در باکتری ها، اهمیت، تظاهرات و خواص اصلی (ماهیت غیر ارثی، سازگاری، فرکانس بالای تغییرات مستقیم و معکوس، بسیاری از عوامل القا کننده).

تنوع ژنوتیپی جهش ها و طبقه بندی آنها جهش زاها تظاهرات فنوتیپی جهش. سرنوشت جهش یافته ها تفکیک در باکتری ها تاثیر انتخاب سیستم ترمیم آسیب ژنوم

تنوع نوترکیبی مکانیسم های تشکیل ژنوم های ترکیبی. فراوانی تغییرات در ویژگی های فردی. تبدیل، تبدیل، صرف.

اهمیت عملی دانش در مورد ژنتیک میکروب ها. اصول نقشه برداری ژنتیکی

روش های آنالیز ژنتیکی (هیبریداسیون مولکولی، واکنش زنجیره ای پلیمراز، بلات، توالی یابی).

مفهوم مهندسی ژنتیک و استفاده از روش های آن در میکروبیولوژی و بیوتکنولوژی. تولید و استفاده از واکسن ها و سیتوکین های دستکاری شده ژنتیکی.

اقدامات ضد میکروبی تأثیر عوامل محیطی بر میکروب ها. اثر عوامل فیزیکی (دما، خشک شدن، تابش، اولتراسوند، فشار اسمزی). اثر عوامل شیمیایی

اهداف، روش ها، ابزارها و اهداف استریلیزاسیون و ضد عفونی در عمل پزشکی و میکروبیولوژیکی. کنترل کیفیت ضد عفونی کنترل عقیم سازی و عقیم سازی. روش های اجرا.

داروهای شیمی درمانی خواص. گروه های اصلی داروهای شیمی درمانی مکانیسم اثر بر روی باکتری ها مفهوم گزینش پذیری و "هدف" عمل.

آنتی بیوتیک ها.

تعریف. تولید کنندگان آنتی بیوتیک آنتی بیوتیک های مصنوعی و نیمه مصنوعی.

گروه های اصلی آنتی بیوتیک ها بر اساس ساختار شیمیایی. آنتی بیوتیک های بتالاکتام تتراسایکلین ها. آمینوگلیکوزیدها ماکرولیدها و آزولیدها. آنسامایسین ها (ریفامپیسین ها). لوومایستین آنتی بیوتیک های فلوروکینولون لینکومایسین پلی میکسین ها گلیکوپپتیدها

طبقه بندی آنتی بیوتیک ها بر اساس مکانیسم اثر بر روی سلول باکتری.

مکانیسم های مقاومت میکروارگانیسم ها در برابر داروهای ضد باکتری.

روش های تعیین حساسیت باکتری ها به آنتی بیوتیک ها و سایر داروهای شیمی درمانی. تکنیک تنظیم، ثبت و ارزیابی حساسیت با استفاده از روش دیسک، E-test، رقت های سریال.9

موضوع:شماره درس

اکولوژی باکتری ها. عفونت. میکروارگانیسم های بیماری زا سموم میکروبی روش بیولوژیک (تجربی).

چک لیست . میکرو فلور بدن انسان

میکرو فلور طبیعی (مقیم) انسان. میکرو فلور اتوکتون و آلوکتون، جداری و مجرا. تشکیل و توسعه میکرو فلور طبیعی. عملکردهای میکرو فلور طبیعی: ضد عفونی، متابولیک، ایمونوبیولوژیک، آنتی سمی.

دیس میکروبیوسنوز (دیسباکتریوز)، علل، انواع، اصول اصلاح.

مفهوم عفونت تعریف، مشخصات کلی. تفاوت بیماری های عفونی و غیر عفونی

نقش میکروارگانیسم در فرآیند عفونی دوز عفونی روش های عفونت دروازه ورودی. بیماری زایی و بیماری زایی. کنترل ژنتیکی بیماری زایی و حدت. عواملی که باعث افزایش و کاهش حدت میکروب ها می شود.

عوامل بیماری زایی روشهای تعیین حدت، واحدها. اجباری کردن میکروارگانیسم های بیماری زا و مشروط بیماری زا.

سمیت و سم زایی میکروارگانیسم ها. اندوتوکسین ها، خواص، تولید، کاربرد. اگزوتوکسین ها، خواص، تولید، واحدهای اندازه گیری. انواع اگزوتوکسین ها، مکانیسم اثر.

طبقه بندی فرآیندهای عفونی بر اساس شدت، ماهیت پاتوژن، منبع عفونت، نحوه انتقال پاتوژن و مکانیسم عفونت، و شیوع. طبقه بندی فرآیندهای عفونی با توجه به محلی سازی کانون میکروبی، مدت دوره و فراوانی عفونت.

دینامیک فرآیند عفونی، ویژگی های آن.

روش تحقیق بیولوژیکی (تجربی)، مراحل، ارزیابی. حیوانات آزمایشگاهی روش های عفونت

کار آزمایشگاهی

1 مطالعه میکرو فلور طبیعی.

الف) کاشت برای مطالعه میکرو فلور طبیعی پوست دست بر روی محیط اندو و آگار خون روش کپی.

اصل روش:تکه های استریل کاغذ صافی 1×1 سانتی متر را در ظرف پتری با نمک استریل مرطوب کنید. راه حل. با استفاده از موچین استریل، یک تکه کاغذ را به مدت 0.5 دقیقه روی سطح پوست قرار دهید تا معاینه شود. کاغذ را به مدت 1 دقیقه روی سطح یک ماده مغذی متراکم قرار دهید. کاغذ را بردارید. صفحات چاپ شده را در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 تا 48 ساعت انکوبه کنید.

ج) ثبت تلقیح میکرو فلور، تهیه آماده سازی از انواع کلنی ها، رنگ آمیزی گرم، میکروسکوپ (در تلقیح های نمایشی).

حسابداری تلقیح میکرو فلورا:

میکروسکوپ آماده سازی:

دارو______________ _______________________ رنگ آمیزی _______________ _______________________

دارو______________ _______________________ رنگ آمیزی _______________ _______________________

2 ارزیابی چسبندگیE. coliتوانایی آنها برای جذب روی سطح گلبول های قرمز خون

اصل روش:کشت آزمایشی میکروارگانیسم ها به سوسپانسیون گلبول قرمز اضافه می شود. پس از انکوباسیون، اسمیر تهیه می شود، رنگ آمیزی می شود و میانگین تعداد باکتری های جذب شده روی یک گلبول قرمز زیر میکروسکوپ تعیین می شود.

در این حالت از گلبول های قرمز به عنوان سلول مدل یک میکروارگانیسم حساس استفاده می شود.

3 تعیین آنزیم های مهاجم در استافیلوکوک ها

1. پلاسموکوآگولاز

اصل روش: کشت آزمایش به یک لوله آزمایش حاوی پلاسمای خون خرگوش سیترات شده اضافه می شود. پس از انکوباسیون در ترموستات، نتیجه در نظر گرفته می شود. اگر نتیجه مثبت باشد، پلاسما لخته می شود (لخته می شود).

2.فیبرینولیزین

اصل روش: کشت آزمایش به یک لوله آزمایش حاوی فیبرین (لخته خون شسته شده از گلبول های قرمز) اضافه می شود. پس از انکوباسیون در ترموستات، نتیجه در نظر گرفته می شود. اگر نتیجه مثبت باشد، لخته حل می شود.

3.هیالورونیداز

اصل روش: کشت آزمایشی با اسید هیالورونیک (HA) به لوله آزمایش اضافه می شود. پس از انکوباسیون در ترموستات، یک معرف اضافه می شود که باعث انعقاد HAA می شود و نتیجه در نظر گرفته می شود. اگر نتیجه مثبت باشد (به دلیل تقسیم HAA)، هیچ لخته ای تشکیل نمی شود.

4.لسیتوویتلاز (لسیتیناز)

اصل روش: کشت های استافیلوکوک جدا شده روی زرده نمک آگار که حاوی 7.5 درصد کلرید سدیم و یک سوسپانسیون زرده است تلقیح می شوند. اگر نتیجه مثبت باشد، به دلیل تجزیه لسیتین موجود در زرده تخم مرغ، یک هاله رنگین کمان در اطراف مستعمرات استافیلوکوک های بدخیم تشکیل می شود.

نتیجه گیری: (آنزیم های حدت هر یک از دو سویه مورد مطالعه را فهرست کنید) ________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

سموم باکتریایی

سمیت _________________________________________________________________________________

سم زایی _________________________________________________________________________________

اندوتوکسین _________________________________________________________________________________

شوک اندوتوکسیک _________________________________________________________________________________

کاربرد عملی اندوتوکسین ها:

اگزوتوکسین _________________________________________________________________________________

آناتوکسین _________________________________________________________________________________

طرحی برای به دست آوردن اگزوتوکسین و توکسوئید.

1.____________________________________________________________________________________________

2.____________________________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________________________

استفاده عملی از سموم:

1.____________________________________________________________________________________________

2.____________________________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________________________

این سخنرانی روش های اصلی برای تعیین حساسیت را مورد بحث قرار می دهد درونکشتگاهیمیکروارگانیسم ها به داروهای ضد میکروبی (دیسک دیفیوژن، E-test، روش های رقیق سازی). رویکردهای تجویز تجربی و اتیوتروپیک آنتی بیوتیک ها در عمل بالینی منعکس شده است. مسائل تفسیر نتایج تعیین حساسیت از دیدگاه بالینی و میکروبیولوژیکی مورد بحث قرار می گیرد.

در حال حاضر، در عمل بالینی، دو اصل برای تجویز داروهای ضد باکتری وجود دارد: تجربی و اتیوتروپیک. تجویز تجربی آنتی بیوتیکبر اساس دانش حساسیت طبیعی باکتری ها، داده های اپیدمیولوژیک در مورد مقاومت میکروارگانیسم ها در منطقه یا بیمارستان، و همچنین نتایج مطالعات بالینی کنترل شده. مزیت بدون شک تجویز تجربی شیمی درمانی، امکان شروع سریع درمان است. علاوه بر این، این رویکرد هزینه های تحقیقات اضافی را حذف می کند.

با این حال، اگر درمان مداوم ضد باکتریایی بی اثر باشد، در صورت عفونت های بیمارستانی، زمانی که حدس زدن پاتوژن و حساسیت آن به آنتی بیوتیک ها دشوار است، آنها تمایل به انجام درمان اتیوتروپیک دارند. تجویز اتیوتروپیک آنتی بیوتیک هانه تنها شامل جداسازی عامل عفونی از مواد بالینی، بلکه تعیین حساسیت آن به آنتی بیوتیک ها نیز می شود. دستیابی به داده های صحیح تنها با اجرای شایسته تمام مراحل تحقیقات باکتریولوژیک امکان پذیر است: از گرفتن مواد بالینی، انتقال آن به آزمایشگاه باکتریولوژیک، شناسایی پاتوژن تا تعیین حساسیت آن به آنتی بیوتیک ها و تفسیر نتایج به دست آمده.

دلیل دوم برای نیاز به تعیین حساسیت میکروارگانیسم ها به داروهای ضد باکتری به دست آوردن اطلاعات اپیدمیولوژیک در مورد ساختار مقاومت پاتوژن های عفونت های اکتسابی و بیمارستانی است. در عمل، این داده ها در تجویز تجربی آنتی بیوتیک ها و همچنین برای تشکیل فرمول های بیمارستانی استفاده می شود.

روش های تعیین حساسیت به آنتی بیوتیک ها

روش های تعیین حساسیت باکتری ها به آنتی بیوتیک ها به 2 گروه تقسیم می شوند: روش های انتشار و رقیق سازی.

هنگام تعیین حساسیت به روش دیسک دیفیوژن، سوسپانسیون باکتریایی با چگالی معین (معمولاً معادل استاندارد کدورت مک فارلند 0.5) روی سطح آگار در ظرف پتری اعمال می شود و سپس دیسک هایی حاوی مقدار معینی آنتی بیوتیک قرار می گیرد. . انتشار آنتی بیوتیک در آگار منجر به تشکیل منطقه ای برای سرکوب رشد میکروارگانیسم ها در اطراف دیسک می شود. پس از انکوباسیون ظروف در یک ترموستات در دمای 35 o -37 o C در طول شب، با اندازه گیری قطر ناحیه اطراف دیسک بر حسب میلی متر، نتیجه در نظر گرفته می شود.

تصویر 1.تعیین حساسیت میکروارگانیسم ها با استفاده از روش انتشار دیسک.

تعیین حساسیت یک میکروارگانیسم با استفاده از آزمون E مشابه آزمایش با روش انتشار دیسک انجام می شود. تفاوت در این است که به جای دیسک با آنتی بیوتیک، از نوار تست E استفاده می شود که حاوی گرادیان غلظت آنتی بیوتیک از حداکثر به حداقل است (). در تقاطع ناحیه بیضی شکل مهار رشد با نوار تست E، مقدار حداقل غلظت بازدارنده (MIC) به دست می آید.

شکل 2.تعیین حساسیت میکروارگانیسم ها با استفاده از آزمون E.

مزیت بی‌تردید روش‌های انتشار، سهولت آزمایش و دسترسی در هر آزمایشگاه باکتری‌شناسی است. با این حال، با توجه به هزینه بالای تست های الکترونیکی، معمولا از روش انتشار دیسک برای کارهای معمول استفاده می شود.

روش های پرورشبر اساس استفاده از رقت‌های سریال دوگانه غلظت آنتی‌بیوتیک از حداکثر به حداقل (به عنوان مثال، از 128 میکروگرم در میلی‌لیتر، 64 میکروگرم در میلی‌لیتر و غیره تا 0.5 میکروگرم در میلی‌لیتر، 0.25 میکروگرم در میلی‌لیتر و 0.125 میکروگرم در میلی‌لیتر) است. در این حالت، آنتی بیوتیک در غلظت های مختلف به یک محیط غذایی مایع (براث) یا آگار اضافه می شود. سپس یک سوسپانسیون باکتریایی با چگالی مشخص، مطابق با استاندارد کدورت مک فارلند 0.5، در آبگوشت آنتی بیوتیکی یا روی سطح صفحه آگار قرار می گیرد. پس از انکوباسیون یک شبه در دمای 35 o -37 o C، نتایج به دست آمده ثبت می شود. وجود رشد میکروارگانیسم در آبگوشت (کدورت آبگوشت) یا روی سطح آگار نشان می دهد که غلظت داده شده آنتی بیوتیک برای سرکوب زنده ماندن آن کافی نیست. با افزایش غلظت آنتی بیوتیک، رشد میکروارگانیسم بدتر می شود. اولین کمترین غلظت آنتی بیوتیک (از یک سری رقت های متوالی) که در آن رشد باکتری از نظر بصری تعیین نمی شود، در نظر گرفته می شود. حداقل غلظت بازدارنده (MIC). MIC بر حسب mg/l یا μg/ml اندازه گیری می شود.

شکل 3.تعیین مقدار MIC با رقیق سازی در یک محیط غذایی مایع.

تفسیر نتایج حساسیت

بر اساس داده‌های کمی به‌دست‌آمده (قطر ناحیه مهار رشد آنتی‌بیوتیک یا مقدار MIC)، میکروارگانیسم‌ها به حساس، نسبتاً مقاوم و مقاوم تقسیم می‌شوند. برای تمایز بین این سه دسته از حساسیت (یا مقاومت) به اصطلاح غلظت های مرزی(نقطه شکست) آنتی بیوتیک (یا مقادیر مرزی قطر منطقه مهار رشد میکروارگانیسم ها).

شکل 4.تفسیر نتایج حاصل از تعیین حساسیت باکتری ها مطابق با مقادیر MIC.

غلظت های مرزی مقادیر تغییرناپذیر نیستند. آنها ممکن است بسته به تغییر در حساسیت جمعیت میکروبی تجدید نظر شوند. توسعه و بازنگری معیارهای تفسیر توسط متخصصان برجسته (شیمی درمانگران و میکروبیولوژیست ها) که اعضای کمیته های ویژه هستند انجام می شود. یکی از آنها کمیته ملی استانداردهای آزمایشگاهی بالینی ایالات متحده (NCCLS) است. در حال حاضر استانداردهای NCCLS در سراسر جهان به رسمیت شناخته شده است و به عنوان استانداردهای بین المللی برای ارزیابی نتایج تعیین حساسیت باکتری ها در مطالعات میکروبیولوژیکی و بالینی چند مرکزی استفاده می شود.

دو رویکرد برای تفسیر نتایج حساسیت وجود دارد: میکروبیولوژیکی و بالینی. تفسیر میکروبیولوژیکی مبتنی بر تجزیه و تحلیل توزیع غلظت های آنتی بیوتیکی است که زنده ماندن باکتری ها را سرکوب می کند. تفسیر بالینی بر اساس ارزیابی اثربخشی درمان آنتی بیوتیکی است.

میکروارگانیسم های حساس (حساس)

از نظر بالینی، باکتری ها به عنوان حساس طبقه بندی می شوند (با در نظر گرفتن پارامترهای به دست آمده). درونکشتگاهی، اگر هنگام درمان عفونت های ناشی از این میکروارگانیسم ها با دوزهای استاندارد یک آنتی بیوتیک، اثر درمانی خوبی مشاهده شود.

در غیاب اطلاعات بالینی قابل اعتماد، تقسیم به دسته های حساسیت بر اساس یک حساب مشترک از داده های به دست آمده است درونکشتگاهیو فارماکوکینتیک، یعنی. بر روی غلظت آنتی بیوتیک قابل دستیابی در محل عفونت (یا در سرم خون).

میکروارگانیسم های مقاوم

زمانی که در درمان عفونت ناشی از این میکروارگانیسم‌ها، حتی با استفاده از حداکثر دوز آنتی‌بیوتیک، هیچ اثری از درمان وجود نداشته باشد، باکتری‌ها به عنوان مقاوم (مقاوم) طبقه‌بندی می‌شوند. چنین میکروارگانیسم هایی مکانیسم های مقاومتی دارند.

میکروارگانیسم های با مقاومت متوسط ​​(متوسط)

از نظر بالینی، زمانی که عفونت های ناشی از این گونه سویه ها ممکن است نتایج درمانی متفاوتی داشته باشند، مقاومت متوسط ​​در باکتری ها وجود دارد. با این حال، اگر آنتی بیوتیک در دوز بالاتر از استاندارد استفاده شود یا عفونت در ناحیه ای باشد که در آن داروی ضد باکتری در غلظت های بالا تجمع می یابد، درمان ممکن است موفقیت آمیز باشد.

از دیدگاه میکروبیولوژیک، باکتری‌های با مقاومت متوسط ​​شامل زیرجمعیت‌هایی هستند که مطابق با مقادیر MIC یا قطر ناحیه، بین میکروارگانیسم‌های حساس و مقاوم قرار دارند. گاهی اوقات سویه های مقاوم در برابر متوسط ​​و باکتری های مقاوم در یک دسته از میکروارگانیسم های مقاوم ترکیب می شوند.

لازم به ذکر است که تفسیر بالینی حساسیت باکتریایی به آنتی بیوتیک ها مشروط است، زیرا نتیجه درمان همیشه تنها به فعالیت داروی ضد باکتری در برابر پاتوژن بستگی ندارد. طبق تحقیقات، پزشکان از مواردی که میکروارگانیسم ها مقاوم هستند آگاه هستند درونکشتگاهی، اثر بالینی خوبی دریافت کرد. برعکس، اگر پاتوژن حساس باشد، درمان ممکن است بی اثر باشد.

در شرایط بالینی خاص، زمانی که نتایج تست حساسیت با روش‌های معمولی کافی نیست، حداقل غلظت باکتری‌کشی تعیین می‌شود.

حداقل غلظت باکتری کش (MBC)- کمترین غلظت آنتی بیوتیک (mg/l یا μg/ml) که در طول مطالعه درونکشتگاهیباعث مرگ 99.9 درصد از میکروارگانیسم ها از سطح اولیه در یک دوره زمانی معین می شود.

ارزش MBC در درمان با آنتی بیوتیک هایی که دارای اثر باکتریواستاتیک هستند یا در صورت عدم وجود اثر درمان ضد باکتری در دسته خاصی از بیماران استفاده می شود. موارد خاص برای تعیین MBC ممکن است، به عنوان مثال، اندوکاردیت باکتریایی، استئومیلیت، یا عفونت های عمومی در بیماران مبتلا به شرایط نقص ایمنی باشد.

در پایان، مایلم یادآوری کنم که امروزه هیچ روشی وجود ندارد که به ما امکان دهد با اطمینان مطلق تأثیر بالینی آنتی بیوتیک ها را در درمان بیماری های عفونی پیش بینی کنیم. با این حال، این نتایج حساسیت می تواند به عنوان راهنمای خوبی برای پزشکان برای انتخاب و تنظیم درمان ضد باکتری باشد.

میز 1.معیارهای تفسیر حساسیت باکتریایی

Etest® یک نوار پلاستیکی بی اثر است که با یک عامل ضد میکروبی در یک گرادیان غلظت از حداقل تا حداکثر، در محدوده ای معادل 15 رقت 2 برابری پوشیده شده است. در طرف دیگر نوار مقیاسی از حداقل غلظت های بازدارنده مربوطه (MIC) وجود دارد. تست های الکترونیکی به شما امکان می دهد حداقل غلظت مهاری یک داروی ضد میکروبی را تعیین کنید (روش انتشار کمی).
. یک پلیت را با کشت میکروارگانیسم تلقیح کنید.
. نوارهای Etest® (حداکثر 2 عدد در هر فنجان استاندارد با قطر 90 میلی متر یا حداکثر 6 عدد در هر فنجان با قطر 180 میلی متر) قرار دهید.
. در طول فرآیند کشت، یک ناحیه بیضی شکل از مهار رشد در اطراف نوار تشکیل می شود که نوار را در نقطه مربوط به MIC قطع می کند.
. بیش از 20 سال است که از آزمون های الکترونیکی استفاده می شود.
. بیش از 100 داروی ضد میکروبی.
. نوارهایی برای تشخیص مقاومت چند دارویی
. تعیین حساسیت میکروارگانیسم های سختگیر، استرپتوکوک، میکروارگانیسم های بی هوازی، قارچ ها (از جمله کپک ها)، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و غیره.
. فرم انتشار راحت: 30 یا 100 قطعه، در بسته بندی تاول یا کارتریج فوم.

	شماره کاتالوگ
	شخصی بسته بندی	کارتریج فوم (دمای نگهداری +20°С / +4°С)		(دمای نگهداری -20 درجه سانتیگراد)
نام	30 نوار	100 نوار	30 نوار	100 نوار	30 نوار
ضد قارچ
تست الکترونیکی آمفوتریسین		526318	526310
تست الکترونیکی Anidulafungin				532008	532000
تست الکترونیکی وریکونازول		532818	532810
تست الکترونیکی ایتراکونازول	412380	525818	525810
تست الکترونیکی Caspofungin	412269	532418	532410
تست الکترونیکی کتوکونازول		525918	525910
تست الکترونیکی Micafungin				535708	535700
تست الکترونیکی پوزاکونازول			532118	532110
تست الکترونیکی فلوکونازول	412350	510818	510810
تست الکترونیکی فلوسیتوزین		510918	510910
ضد سل
تست الکترونیکی ایزونیازید					527900
تست الکترونیکی اتامبوتول					527700
تست الکترونیکی اتیونامید					527500
آنتی باکتریال
تست الکترونیکی آزیترومایسین	412251	501618
تست الکترونیکی Aztreonam	412259	501718	501710
تست الکترونیکی آمیکاسین	412219	501318
تست الکترونیکی آموکسی سیلین	412243	500918
تست الکترونیکی آموکسی سیلین/کلاوولانیک اسید (2/1)	412241	501018	501010
تست الکترونیکی آمپی سیلین	412253	501518
تست الکترونیکی آمپی سیلین/سولباکتام (2/1)	412251*	501818	501810
تست الکترونیکی باسیتراسین				528608	528600
تست الکترونیکی بنزیل پنی سیلین (غلظت بالا)	412263	502518
تست الکترونیکی بنزیل پنی سیلین (غلظت کم)	412265	502618
تست الکترونیکی ونکومایسین	412488	525518
تست الکترونیکی گاتیفلوکساسین		530218	530210
تست الکترونیکی جنتامایسین (غلظت بالا)				512708	512700
تست الکترونیکی جنتامایسین (غلظت کم)	412368	512518
تست الکترونیکی داپتومایسین	412324	535018	535010
تست الکترونیکی داکسی سایکلین	412328***	509718	509710
تست الکترونیکی دوریپنم	412326***	535918	535910
تست الکترونیکی ایمی پنم	412374	513618
تست الکترونیکی کانامایسین		527818	527810
تست الکترونیکی کلاریترومایسین		508718	508710
آزمایش الکترونیکی کلیندامایسین	412315	509518
تست الکترونیکی کولیستین	412317**			537308	537300
تست الکترونیکی لووفلوکساسین	412393	527418
تست الکترونیکی Linezolid	412396	531318
تست الکترونیکی مروپنم	412402	513818
تست الکترونیکی مترونیدازول	412404	530018
تست الکترونیکی Mecillinam				513708	513700
تست الکترونیکی ماینوسایکلین	412409***	516018	516010
تست الکترونیکی موکسی فلوکساسین	412411**	529018	529010
تست الکترونیکی موپیروسین	412417***	413496			516300
E-test Nalidixic acid				516508	516500
تست الکترونیکی Netilmicin		517518	517510
تست الکترونیکی نیتروفورانتوئین	412426***			530408	530400
تست الکترونیکی نورفلوکلاسین	412428**			519508	519500
تست الکترونیکی اگزاسیلین	412432	520518
تست الکترونیکی افلوکساسین		519618	519610
تست الکترونیکی پیپراسیلین		521518	521510
تست الکترونیکی پیپراسیلین/تازوباکتام (4 میکروگرم در میلی لیتر)	412434	521418
تست الکترونیکی پلی میکسین				533408	533400
تست الکترونیکی ریفامپیسین	412450	526018	526010
تست الکترونیکی اسپکتینومایسین		529218	529210
تست الکترونیکی استرپتومایسین	412454			526808	526800
تست الکترونیکی سولفامتوکسازول		534118	534110
تست الکترونیکی تیکوپلانین	412461	522018
تست الکترونیکی تتراسایکلین	412471	522518
تست الکترونیکی Tigecycline	412475	533518
E-test Ticarcillin/clavulanic acid		522618	522610
تست الکترونیکی توبرامایسین (غلظت بالا)				533108	533100
تست الکترونیکی توبرامایسین (غلظت کم)		522718	522710
تری متوپریم E-test		523618	523610
E-test Trimethoprim/sulfamethoxazole (1/16)	412481	524418
تست الکترونیکی فسفومایسین				529108	529100
تست الکترونیکی اسید فوزیدیک		511518	511510
آزمون الکترونیکی Quinupristin/dalfopristin		528718	528710
تست الکترونیکی کلرامفنیکل	412309	507518	507510
تست الکترونیکی Cefaclor		504518	504510
تست الکترونیکی سفالوتین	412307	503518	503510
تست الکترونیکی سفپیم	412273	505018	505010
تست الکترونیکی سفیکسیم	412275	529918	529910
تست الکترونیکی سفوکسیتین	412285	506518	506510
تست الکترونیکی سفوپرازون/سولباکتام (2/1)		529318	529310
تست الکترونیکی سفوتاکسیم (غلظت بالا)	412279	505518
تست الکترونیکی سفوتاکسیم (غلظت کم)	412281	505618
تست الکترونیکی Cefotetan				506308	506300
تست الکترونیکی با Cefpir				506408	506400
تست الکترونیکی Cefpodoxime		505818	505810
تست الکترونیکی سفتازیدیم	412293	506718
تست الکترونیکی سفتارولین	412291
تست الکترونیکی سفتیزوکسیم				527308	527300
تست الکترونیکی سفتوبیپرول	412297
تست الکترونیکی سفتریاکسون (غلظت بالا)	412301	506618			506700
تست الکترونیکی سفتریاکسون (غلظت کم)	412303	507018			507000
تست الکترونیکی سفوروکسیم		506918	506910
تست الکترونیکی سیپروفلوکساسین	412311	508618
تست الکترونیکی انروفلوکساسین				528908	528900
تست الکترونیکی اریترومایسین	412334	510518
تست الکترونیکی Ertapenem	412332	531618	531610

	شماره توسط کاتالوگ
	شخصی بسته بندی	بسته بندی سکشن پلاستیکی (دمای نگهداری -20 درجه سانتیگراد)
نام	30 نوار	100 نوار	30 نوار
تعیین مقاومت چند دارویی
تست الکترونیکی سفوتاکسیم / سفوتاکسیم + اسید کلاولانیک (4 میکروگرم در میلی لیتر)	412336**	532208	532200
تست الکترونیکی سفتازیدیم / سفتازیدیم + اسید کلاولانیک (4 میکروگرم در میلی لیتر) طراحی شده برای تعیین حضور آنزیم های بتالاکتاماز با طیف گسترده (ESBLs) مهار شده توسط اسید کلاوولانیک در باکتری های گرم منفی، از جمله کلبسیلا، اشریشیا کلی، پروتئوس میرابیلیس، سایر اعضای خانواده انتروباکتریاسه، سودوموناس آئروژینوزا.	412340**	532508	532500
تست الکترونیکی سفپیم / سفپیم + اسید کلاوولانیک (4 میکروگرم در میلی لیتر) طراحی شده برای تعیین حضور آنزیم های بتالاکتاماز با طیف گسترده (ESBLs) مهار شده توسط اسید کلاوولانیک در باکتری های گرم منفی، از جمله کلبسیلا، اشریشیا کلی، پروتئوس میرابیلیس، سایر اعضای خانواده انتروباکتریاسه، سودوموناس آئروژینوزا.	412338**	534708	534700
تست الکترونیکی ایمی پنم / ایمی پنم + EDTA برای تعیین وجود آنزیم های متالو بتالاکتاماز در باکتری های گرم منفی، از جمله سودوموناس، اسینتوباکتر، طراحی شده است.		534208	534200
تست الکترونیکی وانکومایسین / تیکوپلانین طراحی شده برای تعیین مقاومت (یا مقاومت متوسط) به گلیکوپپتیدهای باکتری های گرم مثبت، از جمله استافیلوکوکوس اورئوس، Enterococcus spp.		537208	537200
تست الکترونیکی Cefotetan / Cefotetan + claxacillin طراحی شده برای تعیین حضور آنزیم های AmpC-بتا-لاکتاماز در باکتری های گرم منفی		537108	537100

در این بخش، ما به تست انتها به پایان (E2E) نگاه خواهیم کرد: ما کل برنامه را آزمایش خواهیم کرد و این کار را از دیدگاه کاربر انجام خواهیم داد و اساساً تمام اقدامات او را خودکار می کنیم.

در مورد ما، برنامه فقط از یک فرانت اند تشکیل شده است - به سادگی هیچ باطنی وجود ندارد، بنابراین آزمایش E2E شامل باز کردن برنامه در یک مرورگر واقعی، انجام مجموعه ای از محاسبات و بررسی اعتبار مقدار روی صفحه است.

آیا باید همه جایگشت ها را مانند آزمایش های واحد بررسی کنیم؟ نه، زیرا قبلاً تأیید شده است! در تست های E2E، ما عملکرد واحدهای جداگانه را بررسی نمی کنیم، بلکه عملکرد کل سیستم را به یکباره بررسی می کنیم.

چند تست E2E مورد نیاز است؟

اولین دلیلی که باعث می‌شود چنین تست‌هایی زیاد نباشد این است که تست‌های یکپارچه و واحد به‌خوبی نوشته شده کافی باشد. تست های E2E باید بررسی کنند که همه عناصر به درستی به یکدیگر متصل شده اند.

دلیل دوم کندی آنهاست. اگر صد مورد از آنها وجود داشته باشد، مانند آزمون های واحد و ادغام، آنگاه آزمایش انجام می شود خیلیبرای مدت طولانی

دلیل سوم رفتار غیر قابل پیش بینی تست های E2E است. پستی در مورد این پدیده در وبلاگ تست گوگل وجود دارد. تست های واحد این نوع رفتار ناپایدار را نشان نمی دهند. آنها می توانند عبور کنند یا سقوط کنند - و بدون تغییرات قابل مشاهده، صرفاً به دلیل I / O. آیا امکان حذف غیرقابل پیش بینی وجود دارد؟ نه، اما می توانید آن را به حداقل برسانید.

برای از بین بردن غیرقابل پیش بینی بودن، تا حد امکان کمتر تست E2E را انجام دهید. یک تست E2E را برای ده مورد دیگر بنویسید، آن هم فقط زمانی که واقعا ضروری است.

نوشتن تست های E2E

بیایید به نوشتن تست های E2E برویم. ما به دو چیز نیاز داریم: یک مرورگر و یک سرور برای کد ظاهری خود.

ابتدا اجازه دهید نگاهی به راه اندازی وب سرور بیندازیم.

راه اندازی وب سرور در موکا

وب سرور در Node؟ Express بلافاصله به ذهن می رسد، بیایید به کد نگاه کنیم:

اجازه دهید سرور قبل از ((انجام شد) => (const app = express() app.use("/", express.static(path.resolve(__dirname, "../../dist"))) سرور = برنامه. listen(8080، انجام شد))) after(() => (server.close()))

در تابع قبل، ما یک برنامه اکسپرس ایجاد می کنیم، آن را به پوشه dist نشان می دهیم و آن را طوری تنظیم می کنیم که در پورت 8080 گوش کند. در تابع after، سرور را می کشیم.

پوشه dist جایی است که ما اسکریپت های JS خود را ذخیره می کنیم و فایل های HTML و CSS خود را در آن کپی می کنیم. می بینید که ما این کار را در اسکریپت ساخت npm در package.json انجام می دهیم:

( "name": "frontend-test", "scripts": ( "build": "webpack && cp public/* dist", "test": "mocha "test/**/test-*.js" && eslint تست lib"، ...)،

این بدان معناست که برای تست های E2E باید ابتدا npm run build و سپس npm test را اجرا کنید. بله، ناخوشایند است. در مورد تست های واحد، این ضروری نیست، زیرا آنها تحت Node اجرا می شوند و نیازی به ترجمه و اسمبلی ندارند.

برای کامل‌تر شدن، بیایید نگاهی به webpack.config.js بیندازیم، که توضیح می‌دهد چگونه Webpack باید ساخت فایل‌ها را انجام دهد:

Module.exports = ( ورودی: "./lib/app.js"، خروجی: (نام فایل: "bundle.js"، مسیر: path.resolve(__dirname، "dist"))، ... )

پوشه dist هم در محیط کاربری و هم در تست های E2E استفاده می شود. این مهم است - شما باید تست های E2E را در محیط هایی اجرا کنید که تا حد ممکن شبیه به محیط های "مبارزه" هستند.

تنظیمات مرورگر در موکا

برنامه ما روی سرور نصب شده است - تنها چیزی که باقی می ماند راه اندازی مرورگر برای آن است. از کدام کتابخانه برای اتوماسیون استفاده خواهیم کرد؟ من معمولا از سلنیوم-وب درایور محبوب استفاده می کنم.

ابتدا، قبل از وارد شدن به تنظیمات، نگاهی به نحوه استفاده از آن بیندازیم:

Const (prepareDriver, cleanupDriver) = need("../utils/browser-automation") //... describe("app Calculator", function () ( let driver ... before(async () => ( driver = await readyDriver() )) after(() => cleanupDriver(driver)) it("should work", async function () ( await driver.get("http://localhost:8080") //... )))))

در تابع قبل درایور را آماده می کنیم و در تابع بعد آن را پاک می کنیم. آماده سازی درایور مرورگر را راه اندازی می کند و پاکسازی آن را می بندد. توجه داشته باشید که راه اندازی درایور به صورت ناهمزمان انجام می شود و می توانیم از async/wait برای زیباتر کردن کد استفاده کنیم.

در تابع تست، آدرس http://localhost:8080 را باز می کنیم، دوباره با استفاده از await، با توجه به اینکه driver.get یک تابع ناهمزمان است.

پس آماده‌درایور و پاک‌سازی درایور چه شکلی هستند؟

Const webdriver = نیاز ("سلنیوم-وب درایور") const chromeDriver = نیازمند ("chromedriver") مسیر const = نیاز ("مسیر") const chromeDriverPathAddition = `:$(path.dirname(chromeDriver.path))` exports.prepareDriver = async () => (process.on("beforeExit", () => this.browser && this.browser.quit()) process.env.PATH += chromeDriverPathAddition بازگشت در انتظار webdriver.Builder() جدید .disableEnvironmentOverrides() .forBrowser("chrome") .setLoggingPrefs((مرورگر: "ALL"، درایور: "ALL")) .build() ) exports.cleanupDriver = async (درایور) => ( if (driver) ( driver.quit() ) process.env.PATH = process.env.PATH.replace(chromeDriverPathAddition، ""))

این یک چیز پیچیده است. و من باید چیزی را اعتراف کنم: این کد با خون نوشته شده است (اوه، و فقط روی سیستم های یونیکس کار می کند). این با استفاده از اسناد Google، Stack Overflow و webdriver نوشته شد و به شدت توسط پوک علمی اصلاح شد. اما کار می کند!

در تئوری، شما فقط می‌توانید کد را بدون درک آن در تست‌های خود کپی و جای‌گذاری کنید، اما بیایید برای یک ثانیه به آن نگاه کنیم.

دو خط اول وب درایور - یک درایور برای مرورگر را متصل می کند. روش کار Selenium Webdriver این است که دارای یک API (در ماژول selenium-webdriver که در خط 1 وارد می کنیم) است که با هر مرورگری کار می کند و برای مدیریت به درایورهای مرورگر متکی است. مرورگرهای مختلف. درایوری که من استفاده کردم chromedriver است که در خط 2 وارد شده است.

درایور کروم به مرورگر روی دستگاه نیاز ندارد: در واقع فایل اجرایی خود را نصب می‌کند فایل کروموقتی npm را نصب می کنید. متأسفانه، به دلایلی نمی توانم بفهمم، نمی تواند آن را پیدا کند و دایرکتوری chromedriver باید به PATH اضافه شود (این دقیقاً همان چیزی است که در ویندوز کار نمی کند). ما این کار را در خط 9 انجام می دهیم. همچنین در مرحله پاکسازی، در خط 22، آن را از PATH حذف می کنیم.

بنابراین، ما درایور مرورگر را پیکربندی کرده ایم. اکنون زمان پیکربندی (و برگرداندن) درایور وب است، کاری که در خطوط 11-15 انجام می دهیم. و از آنجایی که تابع ساخت ناهمزمان است و برمی گردد، با استفاده از await منتظر آن هستیم.

چرا این کار را در خطوط 11-15 انجام می دهیم؟ دلایل در مه تجربه پنهان است. با خیال راحت کپی پیست کنید - هیچ تضمینی ضمیمه نشده است، اما من مدتی است که از این کد استفاده می کنم بدون هیچ مشکلی.

بیایید تست را شروع کنیم

ما با راه اندازی تمام شده ایم - زمان آن رسیده است که نگاهی به کدی بیندازیم که webdriver برای کنترل مرورگر و آزمایش کد خود استفاده می کند.

طبقه بندی، رویکردهای کلی برای اجرا. روش های انتشار: روش دیسک کاغذی، آزمون الکترونیکی.

روش های تعیین حساسیت باکتری ها به آنتی بیوتیک ها به 2 گروه تقسیم می شوند:
1. روش های انتشار:
. استفاده از دیسک های آنتی بیوتیک
. با استفاده از آزمون های الکترونیکی
2. روش های رقیق سازی سریال:
. رقیق شدن در محیط غذایی مایع (آبگوشت)
. رقیق شدن در محیط آگار
روش های تعیین حساسیت در نیمه دوم دهه 60 - اوایل دهه 70 قرن بیستم توسعه یافت و از آن زمان تاکنون از نظر روش شناختی دستخوش تغییرات اساسی نشده است.
مراحل زیر برای همه روش ها مشترک است:
- تهیه و کنترل کیفیت محیط های غذایی
- تهیه سوسپانسیون میکروارگانیسم های آزمایشی (تلقیح)
- تلقیح
- برای روش های انتشار - مرحله اعمال دیسک ها یا نوارهای آزمایش E-test به یک محیط غذایی جامد.
- دوره نهفتگی یا کمون
- ثبت و تفسیر نتایج
- تدوین توصیه های درمانی
روش های انتشار بر اساس انتشار یک داروی ضد باکتری (ABP) از یک حامل به یک محیط غذایی جامد تلقیح شده با یک میکروارگانیسم، و ثبت قطر منطقه مهار (تاخیر) رشد میکروارگانیسم مورد مطالعه است.
. این روش نسبت به روش رقیق سازی سریال حساسیت و دقت کمتری دارد، اما به دلیل سادگی بیشتر در عمل استفاده می شود. ارسال شده در ref.rf.
. سرعت انتشار هر دارو در آگار به ساختار، وزن مولکولی، وجود ناخالصی ها، ترکیب و pH محیط بستگی دارد.
روش دیسک های کاغذی با آنتی بیوتیک (روش دیسک دیفیوژن).
. برای انجام این روش استفاده کنید چرخ های استاندارد، حاوی مقدار مشخصی آنتی بیوتیک و یک محیط غذایی استاندارد لازم برای رشد این نوع میکروارگانیسم است. در حدود معین، قطر ناحیه بازدارندگی رشد با MIC نسبت معکوس دارد. . یک سوسپانسیون باکتریایی با چگالی مشخص روی سطح آگار در ظرف پتری اعمال می شود. . دیسک های حاوی مقدار مشخصی آنتی بیوتیک قرار داده می شود. . در شرایط مساعد برای هر میکروارگانیسم خاص جوجه کشی کنید. . قطر نواحی بازدارنده رشد در اطراف دیسک بر حسب میلی متر (با در نظر گرفتن قطر دیسک) اندازه گیری می شود. . نتیجه با استفاده از یک جدول ویژه با مقایسه قطر مناطق بازدارنده رشد محصول آزمایش شده با مقادیر مرزی قطر منطقه در جدول ارزیابی می شود. . فرهنگ مورد مطالعه به یکی از سه دسته حساس، نسبتا حساس و مقاوم طبقه بندی می شود.

E-test (E-test یا روش epsilometric)
این روش از نظر فناوری به روش دیسک کاغذی نزدیک است.
. یک نوار باریک از پلیمر (0.5x6.0 سانتی متر) به عنوان یک حامل استفاده می شود که بر روی آن گرادیان غلظت ABP (از حداقل به حداکثر) اعمال می شود. مقادیر غلظت ABP در هر بخش از نوار در سطح خارجی (رو به روی محقق) مشخص می شود.
. مهار رشد میکروارگانیسم ها در اطراف نوار حامل در منطقه ای رخ می دهد که غلظت آنتی بیوتیک منتشر شده از حامل بالاتر از MIC است.
. در تقاطع ناحیه بیضی شکل مهار رشد با نوار تست E، مقدار MIC به دست می آید.
آزمون E ترکیبی از سادگی روش دیسک کاغذی با دقت روش رقت سریال است.

روش های مورد استفاده برای ارزیابی مقایسه ای در شرایط آزمایشگاهی داروهای ضد میکروبی درمانی: روش رقت های سریال در محیط های غذایی مایع و جامد.

روش های رقیق سازی سریال:
. آنها به فرد اجازه می دهند حساسیت میکروارگانیسم جدا شده را نسبت به عوامل ضد باکتری کمی تعیین کنند و MIC دارو را تعیین کنند.
. برای ارزیابی مقایسه ای فعالیت ضد میکروبی در شرایط آزمایشگاهی داروی ژنریک در حال توسعه و داروی اصلی استفاده می شود.
. برای تعیین مقدار MIC، غلظت های مشخصی از آنتی بیوتیک ها به محیط غذایی اضافه می شود که سپس با کشت میکروارگانیسم مورد مطالعه تلقیح می شود. پس از انکوباسیون، وجود یا عدم وجود رشد قابل مشاهده ارزیابی می شود.
. بر اساس استفاده از رقت های سریال دو برابری غلظت ABP از حداکثر به حداقل (به عنوان مثال، از 128 میکروگرم در میلی لیتر، 64 میکروگرم در میلی لیتر، و غیره تا 0.5 میکروگرم در میلی لیتر، 0.25 میکروگرم در میلی لیتر و 0.125 میکروگرم در میلی لیتر) .
. آنها در محیط های غذایی مایع و آگار انجام می شوند. روش رقت های متوالی در محیط غذایی مایع (آبگوشت)
2 گزینه برای این روش وجود دارد:
macromethod (لوله آزمایش) و micromethod (پلیت).
روش ماکرو
. آزمایش در لوله های آزمایش در حجم نهایی 1 میلی لیتر برای هر رقت انجام می شود.
. براث مواد مغذی در 0.5 میلی لیتر در هر لوله آزمایش ریخته می شود. تعداد لوله ها با محدوده رقت مورد نیاز ABP تعیین می شود.
. تهیه سوسپانسیون از میکروارگانیسم های مورد مطالعه:
- یک سوسپانسیون کاری (~ 106 CFU/ml) از یک سوسپانسیون استاندارد از هر میکروارگانیسم مورد مطالعه (~ 108 CFU/ml) تهیه می شود. تهیه رقت های سریالی دو برابری ABP: - تهیه محلول ذخیره ای از ABP داروی ژنریک و داروی مرجع (اصل) با غلظت 1000 میکروگرم بر میلی لیتر و بالاتر (با در نظر گرفتن محتوای ماده فعال). . - از محلول های پایه ABP داروی ژنریک مورد مطالعه و داروی مرجع (اصل)، محلول های کاری ABP با استفاده از یک محیط غذایی مایع تهیه می شود. (غلظت محلول های کاری بر اساس حداکثر غلظت مورد نیاز در یک سری رقت های متوالی با در نظر گرفتن ضریب رقت در طی تلقیح بعدی با سوسپانسیون میکروارگانیسم محاسبه می شود) - رقت های سریال تهیه می شود: 0.5 میلی لیتر از محلول کاری ABP به اولین لوله آزمایش حاوی 0.5 میلی لیتر آبگوشت اضافه می شود. هم بزنید. با استفاده از یک پیپت (نوک)، 0.5 میلی لیتر محلول ABP در آبگوشت را به لوله آزمایش دوم حاوی 0.5 میلی لیتر آبگوشت و غیره انتقال دهید تا تمام ردیف مورد نیازرقت ها 0.5 میلی لیتر از آخرین لوله برداشته می شود. بنابراین یک سری لوله آزمایش با محلول های ABP بدست می آید که غلظت آنها در لوله های آزمایش همسایه 2 برابر متفاوت است. تلقیح: 0.5 میلی لیتر از یک سوسپانسیون میکروبی با غلظت میکروارگانیسم ~ 106 به هر لوله آزمایش با 0.5 میلی لیتر رقت مناسب ABP اضافه می شود. غلظت نهایی میکروارگانیسم در هر لوله ~ 5x105 CFU/ml است. . کنترل - یک لوله آزمایش با آبگوشت و کشت میکروارگانیسم (کنترل رشد). کنترل منفی - یک لوله با آبگوشت (کنترل عقیمی). . جوجه کشی: تمام لوله ها که با درپوش یا درپوش مهر و موم شده اند، تحت شرایطی انکوبه می شوند که رشد میکروارگانیسم های آزمایش را تضمین می کند. . ثبت و تفسیر نتایج: لوله های آزمایش با کشت در نور عبوری مشاهده می شوند. رشد کشت در لوله آزمایش با ABP با لوله کنترل مقایسه می شود. - وجود رشد میکروارگانیسم در آبگوشت (کدر شدن آبگوشت) نشان می دهد که این غلظت آنتی بیوتیک برای سرکوب زنده ماندن آن کافی نیست. - با افزایش غلظت آنتی بیوتیک، رشد میکروارگانیسم بدتر می شود. اولین کمترین غلظت آنتی بیوتیک (از یک سری رقت های متوالی)، که در آن رشد باکتری به صورت بصری تعیین نمی شود، به عنوان حداقل غلظت بازدارنده (MIC) در نظر گرفته می شود. داروهای ضد باکتریایی - نتایج به دست آمده را برای داروی اصلی و داروی ژنریک مورد مطالعه مقایسه کنید. نتیجه گیری در مورد هم ارزی آنها از نظر طیف (فهرست میکروارگانیسم های مورد استفاده) و درجه فعالیت ضد میکروبی (مقادیر MIC) انجام شده است.

. تعیین MBC: از چند لوله آخر با تاخیر رشد، با یک حلقه بر روی بخش های پتری دیش تلقیح کنید. MBC، که معمولاً چندین رقت کمتر از MIC است، به عنوان غلظت دارو در آخرین لوله آزمایش در نظر گرفته می شود که کشت از آن رشدی ایجاد نکرده است. . معایب روش: بهره وری کم - کاربرد محدود به مطالعات تعداد کمی از میکروارگانیسم ها است.
میکرو روش
.رویال آزمایش مشابه روش استفاده از روش ماکرومتد است
حجم نهایی تا 0.2 میلی لیتر در دسترس بودن تجهیزات آزمایشگاهی: یک صفحه 96 چاهی با درب استریل، محلول های کاری ABP را می توان از قبل به چاهک های پلیت اضافه کرد در پلی اتیلن در دمای زیر 60 درجه سانتیگراد تا لحظه استفاده. . مزایای روش: - عملکرد بالا- امکان نگهداری طولانی مدت قرص های از پیش آماده شده - صرفه جویی تدارکات. ارسال شده در ref.rf
روش رقت های سریال در محیط آگار. اصل آزمایش مشابه روش رقیق سازی آبگوشت است. تهیه سوسپانسیون میکروارگانیسم های آزمایشی: - یک سوسپانسیون استاندارد از هر میکروارگانیسم آزمایشی باید حاوی ~ 108 CFU/ml باشد. - سوسپانسیون میکروبی استاندارد برای آزمایش 10 بار رقیق می شود تا غلظت میکروارگانیسم ~ 107 CFU/ml بدست آید. تهیه رقت‌های سریالی دو برابری ABP برای داروی اصلی و داروی ژنریک مورد مطالعه مشابه روش رقت‌سازی در آبگوشت انجام می‌شود. محیط آگار ذوب شده و تا دمای 50-45 درجه سانتی گراد سرد می شود. . تهیه ظروف با محیط آگار و رقت های ABP: محیط آگار و محلول های ABP را مستقیماً در ظرف پتری مخلوط کنید (برای ظروف پلاستیکی با قطر 90 میلی متر، 18 میلی لیتر آگار ذوب شده و سرد شده را به 2 میلی لیتر محلول ABP اضافه کنید). . تلقیح و جوجه کشی: از یک حلقه باکتریولوژیک برای انتقال 1-2 میکرولیتر از سوسپانسیون میکروارگانیسم های مورد مطالعه به سطح محیط آگار استفاده می شود. بنابراین، دوز نهایی تلقیح ~ 10 4 CFU است (یک حلقه باکتریولوژیکی استاندارد با قطر 3 میلی متر، 1-2 میکرولیتر مایع را حمل می کند). . لکه ای به قطر 8-5 میلی متر روی سطح آگار ایجاد می شود. پس از خشک شدن، ظروف برگردانده شده و تحت شرایط مساعد برای رشد میکروارگانیسم های مورد مطالعه انکوبه می شوند. . ثبت و تفسیر نتایج: مشابه روش رقیق سازی آبگوشت. ظروف پتری روی یک سطح تیره و غیر بازتابنده قرار می گیرند. غلظت ABP که باعث مهار کامل رشد قابل مشاهده می شود به عنوان MIC در نظر گرفته می شود. . کنترل: صفحات آگار تلقیح شده با سوسپانسیون کشت های میکروارگانیسم بدون ABP (کنترل رشد). کنترل منفی: صفحات آگار (کنترل استریلیت). مزایای روش: حساسیت چند میکروارگانیسم را می توان در یک صفحه تعیین کرد.

دامنه تحقیق در مورد ارزیابی مقایسه ای فعالیت ضد میکروبی در شرایط آزمایشگاهی برای عوامل ضد میکروبی ژنریک و اصلی.

دامنه تحقیق در مورد ارزیابی مقایسه ای فعالیت ضد میکروبی در شرایط آزمایشگاهی داروهای ضد میکروبی ژنریک:
.هدف مطالعه: تایید انطباق داروی ژنریک با مرجع (اصل) از نظر طیف (میکروارگانیسم ها) و درجه (MIC، مقدار MBC) فعالیت ضد میکروبی.
مجموعه ای از میکروارگانیسم های آزمایش شده: 1-2 سویه از هر میکروارگانیسم موجود در طیف اثر
- سویه های مجموعه مرجع
- سویه های بالینی جدا شده در بیمارستان ها
مقادیر MIC و MBC تعیین می شود
.کنترل: داروی مرجع - داروی اصلی
.نتیجه مورد انتظار: MIC و MBC داروهای ضد میکروبی ژنریک تولید شده در محدوده مقادیر قابل قبول بوده و با MIC و MBC داروهای مرجع (داروهای اصلی) در رابطه با سویه های کلکسیونی و بالینی کاملاً منطبق است.
روش مطالعاتی برای تعیین فعالیت ضد میکروبی ترکیبات ضد میکروبی جدید در شرایط آزمایشگاهی:
ارزیابی اولیه حساسیت به ترکیبات جدید سویه های مرجع انواع مختلف میکروارگانیسم های گرم منفی و گرم مثبت (4-5 سویه برای هر گونه).
.مطالعه دقیق میزان فعالیت ضد باکتریایی ترکیبات در برابر سویه های میکروارگانیسم های گرم منفی و گرم مثبت از مجموعه های بین المللی با مکانیسم های مقاومت شناخته شده (روش رقت سریال).
مطالعه فعالیت بر علیه سویه های بالینی میکروارگانیسم های فرصت طلب و بیماری زا در مقایسه با داروهای شناخته شده از گروه شیمیایی مشابه یا مشابه در اثر ضد میکروبی:
- در صورت فعالیت غالب در برابر میکروارگانیسم های گرم مثبت، کنترل - پنی سیلین های طبیعی، سفالوسپورین های نسل اول و دوم، ماکرولیدها، لینکوزامیدها. - برای فعالیت در برابر میکروارگانیسم های گرم منفی، کنترل - پلی میکسین B، آزترئونام. - برای داروهای طیف گسترده، کنترل - پنی سیلین های نیمه مصنوعی، آمینوگلیکوزیدها، تتراسایکلین ها، سفالوسپورین های نسل III - IV
. ارزیابی فعالیت ضد میکروبی در برابر پاتوژن های مشکل ساز: استافیلوکوک های مقاوم به متی سیلین، استرپتوکوک پنومونی مقاوم به بنزیل پنی سیلین، انتروباکتریاسه های مقاوم به چند دارو، باکتری های مقاوم به آمینوگلیکوزید از جنس سودوموناس و غیره.
غلظت های اولیه درمانی داروهای جدید با در نظر گرفتن سمیت تعیین شده در آزمایش های مطالعه سمیت حاد تعیین می شود.
. درجه نسبی فعالیت ضد باکتریایی داروها با مقدار MIC یا MBC ارزیابی می شود که در کمتر از 2 مقدار از دوز دانه تعیین می شود: حداقل - 10 4 - 10 5 CFU / ml و حداکثر - 10 6 - 10 9 CFU /ml، بسته به نوع پاتوژن؛ تا به امروز، هیچ روشی وجود ندارد که به ما اجازه دهد با اطمینان کامل اثر بالینی آنتی بیوتیک ها را در درمان بیماری های عفونی پیش بینی کنیم. با این حال، این نتایج حساسیت می تواند به عنوان راهنمای خوبی برای پزشکان برای انتخاب و تنظیم درمان ضد باکتری باشد.

سخنرانی، چکیده. روش های تعیین حساسیت میکروارگانیسم ها به آنتی بیوتیک ها - مفهوم و انواع. طبقه بندی، ماهیت و ویژگی ها.

فهرست مطالب کتاب باز بسته می شود

1. میکروبیولوژی دارویی. موضوع و وظایف میکروبیولوژی دارویی.
2. داروسازی و داروسازی: تاریخچه پیدایش و توسعه.
3. طب: تعریف، طبقه بندی.
4. ترکیب داروها | ماده دارویی، ماده کمکی.
5. داروهای اصلی و ژنریک. نام داروها




10. اثر عوامل مخرب بر میکروارگانیسم ها. تاثیر فاکتور دما و استفاده از آن در داروسازی
11. تأثیر تابش بر میکروارگانیسم ها، انواع تشعشعات.
12. تأثیر عوامل مخرب شیمیایی بر میکروارگانیسم ها
13. عقیم سازی. سطح تضمین عقیمی (SAL). معیارهای انتخاب روش استریلیزاسیون.
14. استریلیزاسیون حرارتی و شیمیایی
15. نظارت بر اثربخشی دستگاه های استریل کننده.
16. ضدعفونی صنعتی
17. ضدعفونی کننده ها و ضد عفونی کننده ها. الزامات ضد عفونی کننده های شیمیایی و ضد عفونی کننده ها.
18. نگهدارنده ها و استفاده از آنها در تولید دارو