Metoda difuziei pe disc
Nu mai mult de 6 discuri impregnate cu antibiotice se așează pe suprafața unui mediu nutritiv dens însămânțat peste un gazon continuu cu cultura studiată, la o distanță de cel puțin 2 cm una de alta. Rezultatele se înregistrează după 18-24 de ore de incubare într-un termostat în funcție de diametrul zonei fără creștere din jurul discurilor cu antibiotice. Prezența creșterii în jurul discului indică insensibilitatea acestui microbi la antibiotic. Pentru interpretarea rezultatelor se folosesc tabele speciale.
Figura 1. Determinarea sensibilității
microorganisme folosind metoda difuziei pe disc:
1 – microorganism sensibil la un antibiotic;
2 – microorganism moderat rezistent la un antibiotic;
3 – microorganism grajd la un antibiotic.
Metoda E-test
Principiul metodei. Determinarea sensibilității unui microorganism se realizează în mod similar testării prin metoda difuziei pe disc. Diferența este că, în loc de un disc de antibiotic, se folosește o bandă de testare E care conține un gradient de concentrații de antibiotice de la maxim la minim. La intersecția zonei elipsoidale de inhibare a creșterii cu banda de testare E, se obține valoarea concentrației minime inhibitorii (MIC).
Figura 2. Determinarea sensibilității microorganismelor utilizând teste E
Metoda de diluare în serie în mediu bulion
În eprubete care conțin 1 ml bulion Mueller-Hinton, se prepară diluții în serie de două ori ale medicamentului antibacterian, de exemplu 100 µg/ml - 1, 50 µg/ml - 2, 25 µg/ml - 3, 12,5 µg/ml – a 4-a etc. Apoi se adaugă în fiecare tub 0,1 ml din suspensia bacteriană testată. Totodată, se administrează controlul creșterii (1 ml bulion Mueller-Hinton și 0,1 ml suspensie bacteriană). Culturile sunt incubate la 37°C timp de 18-24 ore, după care se notează rezultatele. Absența turbidității în mediu indică o întârziere a creșterii bacteriene în prezența unei concentrații date de medicament.
Figura 3. Determinarea valorii CMI prin diluare într-un mediu nutritiv lichid
Concentrația minimă inhibitorie (MIC) este cea mai mică concentrație a unui antibiotic (în μg/ml sau mg/l) care inhibă complet creșterea bacteriană vizibilă in vitro.
2 Determinarea sensibilității diferitelor tulpini de stafilococi la antibiotice folosind metoda discului standard
|
Antibiotic |
Zona de inhibare a creșterii, mm |
Caracteristicile tulpinii |
Cultura studiată este sensibilă la ________________________________________________________________
moderat rezistent la ________________________________________________________________________,
rezistent la _________________________________________________________________________________.
3 Determinarea concentrației minime inhibitorii (MIC) a penicilinei prin metoda diluțiilor în serie.
Concluzie: CMI a penicilinei pentru tulpina studiată este _____________________________________
Avantajele metodei:________________________________________________________________________________
Dezavantajele metodei:________________________________________________________________________________
4 Identificarea și înregistrarea efectelor antagoniste ale diferitelor tipuri de bacterii.
Un microb antagonist și tulpinile de testare perpendiculare pe acesta sunt inoculate cu o dungă de-a lungul diametrului pe o placă cu MPA. Rezultatele se înregistrează la o zi după însămânțare. Prezența și gradul de acțiune antagonistă sunt determinate de mărimea zonelor de inhibare a creșterii din culturile de testat.
Semănat de linie _________________________________
Concluzie: cel mai mare efect antagonist a fost detectat pentru tulpinile de testat (specificați specia) _____________________________________________________________________________________________
LECȚIA Nr. 8
SUBIECT: LECȚIA FINALĂ PE TEMA: „ETAPELE ISTORICE ÎN DEZVOLTAREA MICROBIOLOGIEI, MORFOLOGIEI, FIZIOLOGIEI ȘI GENETICII MICROORGANISMELOR.”
Formele și dimensiunile bacteriilor adevărate. Caracteristicile formelor sferice, în formă de tijă și întortocheate ale bacteriilor adevărate.
Structura bacteriilor. Principalele diferențe dintre o celulă procariotă și o celulă eucariotă.
Peretele celular al bacteriilor gram-pozitive și gram-negative.
Tipuri de preparate microscopice. Tehnica de preparare a preparatelor fixe.
Tehnica microscopiei într-un microscop cu lumină. Studiul morfologiei microorganismelor la microscop electronic.
Proprietățile tintoriale ale microbilor. Coloranți. Metode simple de colorare a preparatelor fixe.
Principii de clasificare a procariotelor patogene (Burgee, 2001).
Dispozitive de protecție la microorganisme. Spori, stadii și condiții de formare a sporilor, semnificație biologică.
Capsulele bacteriene, semnificația lor.
Flagelii, structura lor. Cilia. Băutură sexuală.
Metode complexe de vopsire. Tehnici de colorare Gram, Ziehl-Neelsen, Burri-Gins, Neisser.
Metode de studiere a microorganismelor în stare de viață. Testul CON. Principiul metodei.
Spirochetele. Poziția și morfologia sistematică a spirochetelor. Caracteristici ale ultrastructurii și compoziției chimice. Metode de cercetare.
Actinomicete, morfologie, ultrastructură, compoziție chimică. Specii patogene. Rolul actinomicetelor în natură și medicină. Metode de detectare.
Taxonomia chlamydia. Morfologie, structură, metode de detectare. Ciclul de dezvoltare a Chlamydia.
Rickettsia, morfologie, ultrastructură, compoziție chimică. Specii patogene.
Micoplasme. Clasificare. Filogeneza. Metode de detectare.
Forme defecte ale microbilor: protoplaste, sferoplaste, forme L.
Nutriția bacteriilor. Nutrienții sunt surse de carbon și azot. Clasificarea bacteriilor după tipul de nutriție Autotrofe și chimiorganotrofe
Factorii de creștere și sursele lor. Surse de elemente minerale.
Metode și mecanisme de transfer al nutrienților prin membrană.
Cerințele energetice ale bacteriilor. Modalități de obținere a energiei din autotrofe (fotosinteză, chimiosinteză). Surse și modalități de obținere a energiei în chemoorganotrofi.
Tipuri aerobe și anaerobe de oxidare biologică în bacterii. Bacteriile aerobe, anaerobe, anaerobe facultative și microaerofile. Metode de creare a condițiilor anaerobe.
Obiective, etape, avantaje și dezavantaje ale metodei de cercetare bacteriologică (culturală).
Creșterea și reproducerea microorganismelor. Metode de reproducere. Mecanism binar (simplu) de fisiune. Reproducerea populațiilor bacteriene.
Principii și metode de cultivare a bacteriilor. Nevoile nutriționale ale microbilor.
Medii nutritive pentru cultivarea bacteriilor. Cerințe pentru mediile nutritive. Clasificarea mediilor nutritive.
Condiții și tehnici de cultivare a bacteriilor. Tehnica de însămânțare pe medii nutritive. Modele și natura creșterii bacteriene pe medii nutritive solide și lichide.
Metode de izolare a culturilor pure de bacterii aerobe și anaerobe.
Proprietățile microorganismelor utilizate pentru identificarea culturilor izolate.
Enzime bacteriene, clasificare. Metode de studiere a proprietăților biochimice ale microorganismelor. Utilizarea practică a activității biochimice în identificarea bacteriilor
Determinarea proprietăților zaharolitice, compoziția mediilor Hiss; determinarea proprietăților proteolitice, determinarea activității catalazei și oxidazei.
Principiul de funcționare și caracteristicile utilizării dispozitivelor de identificare automată a culturilor bacteriene (hemocultivator, analizor automat).
Caracteristici ale cultivării rickettsiei și chlamydiei.
Bacteriofagi (fagi). Istoria descoperirii. Morfologia, caracteristicile structurale, compoziția chimică și proprietățile fagilor.
Fagi virulenți. Fazele de interacțiune cu o celulă bacteriană. Rezultatele interacțiunii dintre fag și celulă. Fagi temperati. profag. Fenomenul de lizogenie. Conversia fagilor.
Metode de izolare si titrare a bacteriofagelor pe medii nutritive solide si lichide Aplicarea fagilor in microbiologie si medicina. Diagnosticarea fagilor și tiparea fagilor.
Ereditate. Organizarea aparatului genetic în bacterii (nucleoide, plasmide, Este-secvente, transpozoni).
Principii de funcționare a genomului bacterian. Organizarea operonului. Genotip și fenotip.
Plasmide, clasificare, structura și proprietăți ale plasmidelor. R-plasmidă, caracteristici ale structurii și funcției. Plasmide bacteriocinogene.
Variabilitatea microbiană. Modificări ale bacteriilor, semnificație, manifestări și proprietăți principale (natura neereditară, adaptabilitate, frecvența mare a modificărilor directe și inverse, mulți factori inductori).
Variabilitatea genotipică. Mutații și clasificarea lor. Mutageni. Manifestări fenotipice ale mutațiilor. Soarta mutanților. Disocierea în bacterii. Influența selecției. Sistem de reparare a daunelor genomului.
Variabilitatea recombinării. Mecanisme de formare a genomilor combinați. Frecvența modificărilor caracteristicilor individuale. Transformare, transducție, conjugare.
Semnificația practică a cunoștințelor despre genetica microbilor. Principiile cartografierii genetice.
Metode de analiză genetică (hibridare moleculară, reacție în lanț a polimerazei, blotting, secvențiere).
Conceptul de inginerie genetică și utilizarea metodelor sale în microbiologie și biotehnologie. Producerea și utilizarea de vaccinuri și citokine modificate genetic.
Măsuri antimicrobiene. Influența factorilor de mediu asupra microbilor. Acțiunea factorilor fizici (temperatură, uscare, radiații, ultrasunete, presiune osmotică). Acțiunea factorilor chimici.
Scopuri, metode, mijloace și obiecte de sterilizare și dezinfecție în practica medicală și microbiologică. Controlul calității dezinfectării. Controlul sterilizării și sterilității. Metode de realizare.
Antiseptic. Definiție. Agenți antiseptici, cerințe, origine, proprietăți, grupe, mecanisme de acțiune asupra microbilor. Tipuri de antiseptice. Antiseptice terapeutice. Antiseptice preventive.
Medicamente pentru chimioterapie. Proprietăți. Principalele grupe de medicamente pentru chimioterapie. Mecanisme de acțiune asupra bacteriilor. Conceptul de selectivitate și „ținte” acțiunii.
Antibiotice. Definiție. Producători de antibiotice. Antibiotice sintetice și semisintetice.
Principalele grupe de antibiotice după structura chimică. Antibiotice beta-lactamice Tetracicline. Aminoglicozide. Macrolide și azolide. Ansamicine (rifampicine). Levomicetina. Antibiotice fluorochinolone. Lincomicina. Polimixine. Glicopeptide
Clasificarea antibioticelor pe baza mecanismului de acțiune asupra celulei bacteriene.
Mecanisme de rezistență a microorganismelor la medicamentele antibacteriene.
Metode pentru determinarea sensibilității bacteriilor la antibiotice și alte medicamente pentru chimioterapie. Tehnica de setare, înregistrare și evaluare a sensibilității folosind metoda discului, E-test, diluții în serie.
LECȚIA Nr.9
SUBIECT: ECOLOGIA BACTERIILOR. INFECŢIE. MICROORGANISME PATOGENE. TOXINE MICROBIENE. METODĂ BIOLOGICĂ (EXPERIMENTALĂ).
LISTA DE VERIFICARE
Microflora corpului uman . Microfloră umană normală (rezidentă). Microflora autohtonă și alohtonă, parietală și luminală. Formarea și dezvoltarea microflorei normale. Funcțiile microflorei normale: antiinfecțioase, metabolice, imunobiologice, antitoxice.
Dismicrobiocenoza (disbacterioza), cauze, tipuri, principii de corectare.
Conceptul de infecție. Definiție, caracteristici generale. Diferențele dintre bolile infecțioase și bolile neinfecțioase.
Rolul microorganismului în procesul infecțios. Doza infectioasa. Metode de infectare. Poartă de intrare. Patogenitate și virulență. Controlul genetic al patogenității și virulenței. Factori care cresc și scad virulența microbilor.
Factori de patogenitate. Metode de determinare a virulenței, unități. Microorganisme patogene obligatorii și patogene condiționat.
Toxicitatea și toxicitatea microorganismelor. Endotoxine, proprietăți, producție, aplicare. Exotoxine, proprietăți, producție, unități de măsură. Tipuri de exotoxine, mecanism de acțiune.
Rolul macroorganismului în dezvoltarea și evoluția bolilor infecțioase. Factori ereditari. Starea anatomică și fiziologică a corpului. Rolul condițiilor de viață în dezvoltarea și evoluția bolilor infecțioase. Factori naturali. Factori sociali.
Clasificarea proceselor infecțioase după severitate, natura agentului patogen, sursa de infecție, modul de transmitere a agentului patogen și mecanismul de infecție și prevalență. Clasificarea proceselor infecțioase în funcție de localizarea focarului microbian, durata cursului și frecvența infecției.
Dinamica procesului infecțios, caracteristicile sale.
Metoda de cercetare biologică (experimentală), etape, evaluare. Animale de laborator. Metode de infectare.
LUCRĂRI DE LABORATOR
1 Studiul microflorei normale.
A) Semănat pentru studiul microflorei normale a pielii mâinilor pe mediu Endo și agar sânge metoda replica.
Principiul metodei: umeziți bucăți sterile de hârtie de filtru de 1x1 cm într-un vas Petri cu soluție salină sterilă. soluţie. Cu ajutorul unei pensete sterile, așezați o bucată de hârtie pe suprafața pielii care urmează să fie examinată timp de 0,5 minute. Așezați hârtia pe suprafața mediului nutritiv dens (imprimare) timp de 1 minut. Scoateți hârtia. Se incubează plăcile cu amprente la 37 0 C timp de 24-48 ore.
C) Efectuați o înregistrare a inoculării microflorei, pregătiți preparate din diferite tipuri de colonii, colorație Gram, microscop (în inoculări demonstrative).
Luarea în considerare a inoculării microflorei:
Microscopia preparatelor:
|
Un drog______________ _______________________ Colorare _______________ _______________________ |
Un drog______________ _______________________ Colorare _______________ _______________________ |
2 Evaluarea adezivitățiiE. coliprin capacitatea lor de a adsorbi la suprafata globulelor rosii
Principiul metodei: La suspensia eritrocitară se adaugă cultura de testare a microorganismelor. După incubare, frotiurile sunt pregătite, colorate și numărul mediu de bacterii adsorbite pe un globul roșu este determinat la microscop.
În acest caz, celulele roșii din sânge sunt utilizate ca o celulă model a unui microorganism susceptibil.
3 Determinarea enzimelor invazive la stafilococi
1. Plasmocoagulaza
Principiul metodei: Cultura de testat se adaugă într-o eprubetă care conține plasmă de sânge de iepure citrat. După incubarea într-un termostat, rezultatul este luat în considerare. Dacă rezultatul este pozitiv, plasma se coagulează (coagulează).
2.Fibrinolizina
Principiul metodei: Cultura de testat se adaugă într-o eprubetă cu fibrină (un cheag de sânge spălat de globule roșii). După incubarea într-un termostat, rezultatul este luat în considerare. Dacă rezultatul este pozitiv, cheagul se dizolvă.
3.Hialuronidază
Principiul metodei: Cultura testată se adaugă într-o eprubetă cu acid hialuronic (HA). După incubarea într-un termostat, se adaugă un reactiv care provoacă coagularea HAA și se ține cont de rezultat. Dacă rezultatul este pozitiv (din cauza defalcării HAA), nu se formează niciun cheag.
4.Lecitovitellaza (lecitinaza)
Principiul metodei: culturile izolate de stafilococ se inoculează pe agar cu sare de gălbenuș, care conține clorură de sodiu 7,5% și o suspensie de gălbenuș. Dacă rezultatul este pozitiv, se formează un halou curcubeu în jurul coloniilor de stafilococi virulenți din cauza descompunerii lecitinei conținute în gălbenușul unui ou de găină.
Concluzie: (enumerați enzimele de virulență ale fiecăreia dintre cele două tulpini studiate) ________________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Toxine bacteriene
Toxicitate ________________________________________________________________________________________________
Toxigenitate ________________________________________________________________________________________________
Endotoxina ________________________________________________________________________________________________
Șoc endotoxic ________________________________________________________________________________
Aplicarea practică a endotoxinelor:
Exotoxina ________________________________________________________________________________________________
Anatoxina ___________________________________________________________________________________________
Schema de obtinere a exotoxinei si a toxoidului.
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________________________
Utilizarea practică a toxoizilor:
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________________________
Prelegerea discută principalele metode de determinare a sensibilității in vitro microorganisme la medicamentele antimicrobiene (difuzie pe disc, teste E, metode de diluare). Sunt reflectate abordări ale prescrierii empirice și etiotrope a antibioticelor în practica clinică. Sunt discutate problemele interpretării rezultatelor determinării sensibilității din punct de vedere clinic și microbiologic.
În prezent, în practica clinică, există două principii pentru prescrierea medicamentelor antibacteriene: empiric și etiotrop. Prescriere empirica de antibiotice pe baza cunoașterii sensibilității naturale a bacteriilor, a datelor epidemiologice privind rezistența microorganismelor din regiune sau spital, precum și pe rezultatele studiilor clinice controlate. Un avantaj incontestabil al prescrierii empirice a chimioterapiei este posibilitatea inițierii rapide a terapiei. În plus, această abordare elimină costurile cercetării suplimentare.
Totuși, dacă terapia antibacteriană în curs este ineficientă, în cazul infecțiilor nosocomiale, când este dificil de ghicit agentul patogen și sensibilitatea acestuia la antibiotice, aceștia tind să efectueze terapie etiotropă. Prescriere etiotropă a antibioticelor presupune nu numai izolarea agentului infectios din materialul clinic, ci si determinarea sensibilitatii acestuia la antibiotice. Obținerea datelor corecte este posibilă numai cu implementarea competentă a tuturor etapelor cercetării bacteriologice: de la preluarea materialului clinic, transportul acestuia la un laborator bacteriologic, identificarea agentului patogen până la determinarea sensibilității acestuia la antibiotice și interpretarea rezultatelor obținute.
Al doilea motiv al necesității de a determina sensibilitatea microorganismelor la medicamentele antibacteriene este obținerea de date epidemiologice privind structura rezistenței agenților patogeni ai infecțiilor dobândite în comunitate și nosocomiale. În practică, aceste date sunt utilizate în prescrierea empirică a antibioticelor, precum și pentru formarea formularelor spitalicești.
Metode de determinare a sensibilității la antibiotice
Metodele de determinare a sensibilității bacteriilor la antibiotice sunt împărțite în 2 grupe: metode de difuzie și diluare.
La determinarea sensibilității prin metoda difuziei pe disc, pe suprafața unui agar dintr-o cutie Petri se aplică o suspensie bacteriană cu o anumită densitate (de obicei echivalentă cu standardul de turbiditate McFarland de 0,5) și apoi se pun discuri care conțin o anumită cantitate de antibiotic. . Difuzia antibioticului în agar duce la formarea unei zone de suprimare a creșterii microorganismelor în jurul discurilor. După incubarea vaselor într-un termostat la o temperatură de 35 o -37 o C peste noapte, rezultatul este luat în considerare prin măsurarea diametrului zonei din jurul discului în milimetri ().
Poza 1. Determinarea sensibilității microorganismelor prin metoda difuziei pe disc.
Determinarea sensibilității unui microorganism cu ajutorul testului E se realizează în mod similar cu testarea prin metoda difuziei pe disc. Diferența este că în loc de un disc cu antibiotic, se folosește o bandă de testare E care conține un gradient de concentrații de antibiotic de la maxim la minim (). La intersecția zonei elipsoidale de inhibare a creșterii cu banda de testare E, se obține valoarea concentrației minime inhibitorii (MIC).
Figura 2. Determinarea sensibilității microorganismelor cu ajutorul testelor E.
Avantajul incontestabil al metodelor de difuzie este ușurința de testare și accesibilitatea în orice laborator bacteriologic. Cu toate acestea, având în vedere costul ridicat al testelor E, metoda de difuzie pe disc este de obicei utilizată pentru munca de rutină.
Metode de reproducere se bazează pe utilizarea de diluții duble în serie ale concentrațiilor de antibiotic de la maxim la minim (de exemplu, de la 128 μg/ml, 64 μg/ml etc. la 0,5 μg/ml, 0,25 μg/ml și 0,125 μg/ml) . În acest caz, antibioticul în diferite concentrații este adăugat într-un mediu nutritiv lichid (bulion) sau agar. O suspensie bacteriană cu o anumită densitate, corespunzătoare standardului de turbiditate McFarland de 0,5, este apoi plasată într-un bulion de antibiotic sau pe suprafața unei plăci de agar. După incubare peste noapte la o temperatură de 35 o -37 o C se înregistrează rezultatele obţinute. Prezența creșterii microorganismelor în bulion (turbiditatea bulionului) sau pe suprafața agarului indică faptul că concentrația dată de antibiotic este insuficientă pentru a-i suprima viabilitatea. Pe măsură ce concentrația de antibiotic crește, creșterea microorganismului se înrăutățește. Prima cea mai mică concentrație de antibiotic (dintr-o serie de diluții în serie), în care creșterea bacteriană nu este determinată vizual, este considerată a fi concentrație inhibitorie minimă (MIC). CMI se măsoară în mg/l sau μg/ml ().
Figura 3. Determinarea valorii CMI prin diluare într-un mediu nutritiv lichid.
Interpretarea rezultatelor sensibilității
Pe baza datelor cantitative obținute (diametrul zonei de inhibare a creșterii antibioticelor sau valoarea CMI), microorganismele sunt împărțite în sensibile, moderat rezistente și rezistente (). Pentru a distinge între aceste trei categorii de sensibilitate (sau rezistență) așa-numitele concentrații limită(punct de întrerupere) antibiotic (sau valorile limită ale diametrului zonei de inhibare a creșterii microorganismelor).
Figura 4. Interpretarea rezultatelor determinării sensibilității bacteriilor în conformitate cu valorile CMI.
Concentrațiile la limită nu sunt valori imuabile. Ele pot fi revizuite în funcție de modificările sensibilității populației microbiene. Elaborarea și revizuirea criteriilor de interpretare sunt efectuate de specialiști de frunte (chimioterapeuți și microbiologi) care sunt membri ai unor comisii speciale. Unul dintre ele este Comitetul Național al Statelor Unite pentru Standarde de Laboratoare Clinice (NCCLS). În prezent, standardele NCCLS sunt recunoscute în întreaga lume și sunt utilizate ca standarde internaționale pentru evaluarea rezultatelor determinării susceptibilității bacteriilor în studiile microbiologice și clinice multicentre.
Există două abordări pentru interpretarea rezultatelor sensibilității: microbiologică și clinică. Interpretarea microbiologică se bazează pe analiza distribuției concentrațiilor de antibiotice care suprimă viabilitatea bacteriilor. Interpretarea clinică se bazează pe evaluarea eficacității terapiei cu antibiotice.
Microorganisme sensibile (susceptibile)
Din punct de vedere clinic, bacteriile sunt clasificate ca fiind sensibile (ținând cont de parametrii obținuți in vitro), dacă la tratarea infecțiilor cauzate de aceste microorganisme cu doze standard de antibiotic se observă un efect terapeutic bun.
În absența unor informații clinice fiabile, împărțirea în categorii de sensibilitate se bazează pe o relatare comună a datelor obținute in vitro, și farmacocinetică, adică asupra concentrațiilor de antibiotic atinse la locul infecției (sau în serul sanguin).
Microorganisme rezistente
Bacteriile sunt clasificate ca rezistente (rezistente) atunci când, la tratarea unei infecții cauzate de aceste microorganisme, nu există niciun efect al terapiei chiar și atunci când se utilizează doze maxime de antibiotice. Astfel de microorganisme au mecanisme de rezistență.
Microorganisme cu rezistență intermediară (intermediară)
Din punct de vedere clinic, rezistența intermediară a bacteriilor este implicată atunci când infecțiile cauzate de astfel de tulpini pot avea rezultate terapeutice diferite. Cu toate acestea, tratamentul poate avea succes dacă antibioticul este utilizat într-o doză mai mare decât cea standard sau infecția este localizată într-o zonă în care medicamentul antibacterian se acumulează în concentrații mari.
Din punct de vedere microbiologic, bacteriile cu rezistență intermediară includ o subpopulație care, în conformitate cu valorile MIC sau diametrele zonei, se află între microorganismele sensibile și cele rezistente. Uneori, tulpinile cu rezistență intermediară și bacteriile rezistente sunt combinate într-o singură categorie de microorganisme rezistente.
Trebuie remarcat faptul că interpretarea clinică a sensibilității bacteriene la antibiotice este condiționată, deoarece rezultatul terapiei nu depinde întotdeauna doar de activitatea medicamentului antibacterian împotriva agentului patogen. Clinicienii sunt conștienți de cazuri în care, atunci când microorganismele sunt rezistente, potrivit cercetărilor in vitro, a primit un efect clinic bun. În schimb, dacă agentul patogen este sensibil, terapia poate fi ineficientă.
În anumite situații clinice, când rezultatele testării sensibilității prin metode convenționale sunt insuficiente, se determină concentrația bactericidă minimă.
Concentrația minimă bactericidă (MBC)- cea mai mică concentrație de antibiotic (mg/l sau μg/ml), care în timpul studiului in vitro provoacă moartea a 99,9% dintre microorganisme de la nivelul inițial într-o anumită perioadă de timp.
Valoarea MBC este utilizată în terapia cu antibiotice care au efect bacteriostatic sau în absența efectului terapiei antibacteriene la o categorie specială de pacienți. Cazurile speciale pentru determinarea MBC pot fi, de exemplu, endocardita bacteriană, osteomielita sau infecțiile generalizate la pacienții cu stări de imunodeficiență.
În concluzie, aș dori să remarc că astăzi nu există metode care să ne permită să prezicem cu o certitudine absolută efectul clinic al antibioticelor în tratamentul bolilor infecțioase. Cu toate acestea, aceste rezultate de sensibilitate pot servi ca un ghid bun pentru clinicieni pentru a selecta și ajusta terapia antibacteriană.
Tabelul 1. Criterii de interpretare a susceptibilității bacteriene
Etest® este o bandă de plastic inertă care conține un agent antimicrobian într-un gradient de concentrație de la minim la maxim, într-un interval echivalent cu 15 diluții de 2 ori. Pe cealaltă parte a benzii există o scară a concentrațiilor minime inhibitorii (MIC) corespunzătoare. Testele E vă permit să determinați concentrația minimă inhibitorie a unui medicament antimicrobian (metoda de difuzie cantitativă).
. Se inoculează o placă cu o cultură a microorganismului.
. Așezați benzi Etest® (până la 2 pe cupă standard cu diametrul de 90 mm sau până la 6 pe cupă cu diametrul de 180 mm).
. În timpul procesului de cultivare, în jurul benzii se va forma o zonă elipsoidală de inhibare a creșterii, care intersectează banda în punctul corespunzător MIC.
. Testele electronice au fost folosite de mai bine de 20 de ani.
. Peste 100 de medicamente antimicrobiene.
. Benzi pentru detectarea rezistenței multiple la medicamente.
. Determinarea sensibilității microorganismelor pretențioase, streptococilor, microorganismelor anaerobe, ciupercilor (inclusiv mucegaiurilor), mycobacterium tuberculosis etc.
. Formă de eliberare convenabilă: 30 sau 100 de bucăți, în ambalaj blister sau cartuș de spumă.
| Număr de catalog | |||||
| Individual pachet |
Cartuș de spumă (temperatura de depozitare +20°С / +4°С) |
(temperatura de depozitare -20°C) |
|||
| Nume | 30 de benzi | 100 de benzi | 30 de benzi | 100 de benzi | 30 de benzi |
| Antifungic | |||||
| E-test Amfotericină | 526318 | 526310 | |||
| E-test Anidulafungin | 532008 | 532000 | |||
| E-test Voriconazol | 532818 | 532810 | |||
| E-test Itraconazol | 412380 | 525818 | 525810 | ||
| E-test Caspofungin | 412269 | 532418 | 532410 | ||
| E-test Ketoconazol | 525918 | 525910 | |||
| E-test Micafungin | 535708 | 535700 | |||
| E-test Posaconazol | 532118 | 532110 | |||
| E-test Fluconazol | 412350 | 510818 | 510810 | ||
| E-test Flucitozină | 510918 | 510910 | |||
| Antituberculoză | |||||
| E-test izoniazidă | 527900 | ||||
| E-test Etambutol | 527700 | ||||
| E-test Etionamidă | 527500 | ||||
| Antibacterian | |||||
| E-test Azitromicină | 412251 | 501618 | |||
| E-test Aztreonam | 412259 | 501718 | 501710 | ||
| E-test Amikacin | 412219 | 501318 | |||
| E-test Amoxicilină | 412243 | 500918 | |||
| E-test Amoxicilină/acid clavulanic (2/1) | 412241 | 501018 | 501010 | ||
| E-test Ampicilină | 412253 | 501518 | |||
| E-test Ampicilină/sulbactam (2/1) | 412251* | 501818 | 501810 | ||
| E-test Bacitracin | 528608 | 528600 | |||
| E-test Benzilpenicilină (concentrație mare) | 412263 | 502518 | |||
| E-test Benzilpenicilină (concentrație scăzută) | 412265 | 502618 | |||
| E-test Vancomicină | 412488 | 525518 | |||
| E-test Gatifloxacin | 530218 | 530210 | |||
| E-test Gentamicină (concentrație mare) | 512708 | 512700 | |||
| E-test Gentamicină (concentrație scăzută) | 412368 | 512518 | |||
| E-test Daptomicina | 412324 | 535018 | 535010 | ||
| E-test Doxiciclina | 412328*** | 509718 | 509710 | ||
| E-test Doripenem | 412326*** | 535918 | 535910 | ||
| E-test Imipenem | 412374 | 513618 | |||
| E-test Kanamicină | 527818 | 527810 | |||
| E-test Claritromicină | 508718 | 508710 | |||
| E-test Clindamicină | 412315 | 509518 | |||
| E-test Colistin | 412317** | 537308 | 537300 | ||
| E-test Levofloxacin | 412393 | 527418 | |||
| E-test Linezolid | 412396 | 531318 | |||
| E-test Meropenem | 412402 | 513818 | |||
| E-test Metronidazol | 412404 | 530018 | |||
| E-test Mecillinam | 513708 | 513700 | |||
| E-test Minociclina | 412409*** | 516018 | 516010 | ||
| E-test Moxifloxacin | 412411** | 529018 | 529010 | ||
| E-test Mupirocin | 412417*** | 413496 | 516300 | ||
| E-test acid nalidixic | 516508 | 516500 | |||
| E-test Netilmicină | 517518 | 517510 | |||
| E-test Nitrofurantoin | 412426*** | 530408 | 530400 | ||
| E-test Norfloclacin | 412428** | 519508 | 519500 | ||
| E-test Oxacilină | 412432 | 520518 | |||
| E-test ofloxacină | 519618 | 519610 | |||
| E-test piperacilină | 521518 | 521510 | |||
| E-test Piperacilină/tazobactam (4µg/ml) | 412434 | 521418 | |||
| E-test Polimixină | 533408 | 533400 | |||
| E-test Rifampicină | 412450 | 526018 | 526010 | ||
| E-test Spectinomicina | 529218 | 529210 | |||
| E-test Streptomicina | 412454 | 526808 | 526800 | ||
| E-test Sulfametoxazol | 534118 | 534110 | |||
| E-test Teicoplanină | 412461 | 522018 | |||
| E-test Tetraciclină | 412471 | 522518 | |||
| E-test Tigeciclină | 412475 | 533518 | |||
| E-test Ticarcilină/acid clavulanic | 522618 | 522610 | |||
| E-test Tobramicină (concentrație mare) | 533108 | 533100 | |||
| E-test Tobramicină (concentrație scăzută) | 522718 | 522710 | |||
| Trimetoprim E-test | 523618 | 523610 | |||
| E-test Trimetoprim/sulfametoxazol (1/16) | 412481 | 524418 | |||
| E-test Fosfomicină | 529108 | 529100 | |||
| E-test acid fusidic | 511518 | 511510 | |||
| E-test Quinupristin/dalfopristin | 528718 | 528710 | |||
| E-test Cloramfenicol | 412309 | 507518 | 507510 | ||
| E-test Cefaclor | 504518 | 504510 | |||
| E-test Cefalotina | 412307 | 503518 | 503510 | ||
| E-test Cefepime | 412273 | 505018 | 505010 | ||
| E-test Cefixime | 412275 | 529918 | 529910 | ||
| E-test Cefoxitin | 412285 | 506518 | 506510 | ||
| E-test Cefoperazonă/sulbactam (2/1) | 529318 | 529310 | |||
| E-test Cefotaxima (concentrație mare) | 412279 | 505518 | |||
| E-test Cefotaxima (concentrație scăzută) | 412281 | 505618 | |||
| E-test Cefotetan | 506308 | 506300 | |||
| E-test cu Cefpir | 506408 | 506400 | |||
| E-test Cefpodoxima | 505818 | 505810 | |||
| E-test Ceftazidimă | 412293 | 506718 | |||
| E-test Ceftaroline | 412291 | ||||
| E-test Ceftizoxime | 527308 | 527300 | |||
| E-test Ceftobiprol | 412297 | ||||
| E-test Ceftriaxonă (concentrație mare) | 412301 | 506618 | 506700 | ||
| E-test Ceftriaxonă (concentrație scăzută) | 412303 | 507018 | 507000 | ||
| E-test Cefuroximă | 506918 | 506910 | |||
| E-test Ciprofloxacin | 412311 | 508618 | |||
| E-test Enrofloxacin | 528908 | 528900 | |||
| E-test Eritromicină | 412334 | 510518 | |||
| E-test Ertapenem | 412332 | 531618 | 531610 | ||
| Număr cu catalog |
|||
| Individual pachet |
Ambalaj secțional din plastic (temperatura de depozitare -20°C) |
||
| Nume | 30 de benzi | 100 de benzi | 30 de benzi |
| Determinarea multirezistenței la medicamente | |||
| E-test Cefotaxima / Cefotaxima + acid clavulanic (4 μg/ml) |
412336** | 532208 | 532200 |
| E-test Ceftazidimă / Ceftazidimă + acid clavulanic (4 μg/ml) Conceput pentru a determina prezența enzimelor beta-lactamaze cu spectru extins (ESBL) inhibate de acidul clavulanic în bacteriile gram-negative, inclusiv Klebsiella spp., Escherichia coli, Proteus mirabilis, alți membri ai familiei Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412340** | 532508 | 532500 |
| E-test Cefepime / Cefepime + acid clavulanic (4 μg/ml) Conceput pentru a determina prezența enzimelor beta-lactamaze cu spectru extins (ESBL) inhibate de acidul clavulanic în bacteriile gram-negative, inclusiv Klebsiella spp., Escherichia coli, Proteus mirabilis, alți membri ai familiei Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412338** | 534708 | 534700 |
| E-test Imipenem / Imipenem + EDTA Conceput pentru a determina prezența enzimelor metalo-beta-lactamaze în bacteriile gram-negative, inclusiv Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. | 534208 | 534200 | |
| E-test Vancomicină / Teicoplanină Conceput pentru a determina rezistența (sau rezistența moderată) la glicopeptidele bacteriilor gram-pozitive, inclusiv Staphylococcus aureus, Enterococcus spp. |
537208 | 537200 | |
| E-test Cefotetan / Cefotetan + claxacilină Proiectat pentru a determina prezența enzimelor AmpC-beta-lactamaze în bacteriile gram-negative |
537108 | 537100 | |
În această parte, ne vom uita la testarea end-to-end (E2E): vom testa întreaga aplicație și o vom face din punctul de vedere al utilizatorului, automatizând în esență toate acțiunile acestuia.
În cazul nostru, aplicația constă doar dintr-un frontend - pur și simplu nu există backend, așa că testarea E2E va consta în deschiderea aplicației într-un browser real, efectuarea unui set de calcule și verificarea validității valorii pe ecran.
Trebuie să verificăm toate permutările așa cum am făcut-o în testele unitare? Nu, pentru că acest lucru a fost deja verificat! În testele E2E, verificăm performanța nu a unităților individuale, ci a întregului sistem deodată.
Câte teste E2E sunt necesare?
Primul motiv pentru care nu ar trebui să existe multe astfel de teste este că integrarea bine scrisă și testele unitare ar trebui să fie suficiente. Testele E2E trebuie să verifice dacă toate elementele sunt conectate corect între ele.
Al doilea motiv este că sunt lente. Dacă există o sută de ele, cum ar fi testele unitare și de integrare, atunci va avea loc testarea Foarte pentru o lungă perioadă de timp.
Al treilea motiv este comportamentul imprevizibil al testelor E2E. Există o postare despre acest fenomen pe blogul de testare al Google. Testele unitare nu arată acest tip de comportament instabil. Ele pot trece sau căde - și fără modificări vizibile, numai datorită I/O. Este posibil să eliminați imprevizibilitatea? Nu, dar îl poți minimiza.
Pentru a elimina imprevizibilitatea, faceți cât mai puține teste E2E posibil. Scrieți un test E2E pentru alți zece și numai atunci când sunt cu adevărat necesare.
Scrierea testelor E2E
Să trecem la scrierea testelor E2E. Avem nevoie de două lucruri: un browser și un server pentru codul nostru frontend.
Mai întâi, să aruncăm o privire la configurarea unui server web.
Configurarea unui server web în Mocha
Server web pe Node? Îmi vine imediat în minte Express, să ne uităm la cod:
Lăsați serverul înainte((terminat) => (const app = express() app.use("/", express.static(path.resolve(__dirname, "../../dist"))) server = app. listen(8080, done) )) after(() => (server.close() ))
În funcția înainte, creăm o aplicație expres, o îndreptăm către folderul dist și o setăm să asculte pe portul 8080. În funcția după „omorâm” serverul.
Dosarul dist este locul în care stocăm scripturile noastre JS și unde copiem fișierele HTML și CSS. Puteți vedea că facem acest lucru în scriptul de compilare npm din package.json:
( „nume”: „testare front-end”, „scripturi”: ( „build”: „webpack && cp public/* dist”, „test”: „mocha „test/**/test-*.js” && eslint test lib", ... ),
Aceasta înseamnă că pentru testele E2E trebuie să rulați mai întâi npm run build și apoi npm test. Da, este incomod. În cazul testelor unitare, acest lucru nu este necesar, deoarece rulează sub Node și nu necesită traducere și asamblare.
Pentru a fi complet, să aruncăm o privire la webpack.config.js, care descrie modul în care Webpack ar trebui să creeze fișiere:
Module.exports = ( intrare: "./lib/app.js", ieșire: (nume fișier: "bundle.js", cale: path.resolve(__dirname, "dist")), ... )
Folderul dist este folosit atât în mediul de utilizator, cât și în testele E2E. Acest lucru este important - trebuie să rulați teste E2E în medii care sunt cât mai asemănătoare cu cele „de luptă”.
Setările browserului în Mocha
Aplicația noastră este instalată pe server - tot ce rămâne este să lansăm browserul pentru aceasta. Ce bibliotecă vom folosi pentru automatizare? Eu folosesc de obicei popularul selenium-webdriver.
Mai întâi, să aruncăm o privire la modul în care îl folosim înainte de a intra în setări:
Const (prepareDriver, cleanupDriver) = require("../utils/browser-automation") //... describe("aplicație de calcul", funcția () ( lasă driverul ... înainte (async () => ( driver = așteptați prepareDriver() )) după(() => cleanupDriver(driver)) it(„ar trebui să funcționeze”, funcție asincronă () ( așteaptă driver.get(„http://localhost:8080”) //... )) ))
În funcția înainte pregătim șoferul, iar în funcția după îl curățăm. Pregătirea driverului va lansa browserul, iar ștergerea îl va închide. Rețineți că configurarea driverului are loc în mod asincron și putem folosi async/wait pentru a face codul mai frumos.
În funcția de testare, deschidem adresa http://localhost:8080, folosind din nou await, având în vedere că driver.get este o funcție asincronă.
Deci, cum arată prepareDriver și cleanupDriver?
Const webdriver = require("selenium-webdriver") const chromeDriver = require("chromedriver") const path = require("cale") const chromeDriverPathAddition = `:$(path.dirname(chromeDriver.path))` exports.prepareDriver = async () => ( process.on("beforeExit", () => this.browser && this.browser.quit()) process.env.PATH += chromeDriverPathAddition return așteaptă noul webdriver.Builder() .disableEnvironmentOverrides() .forBrowser(„chrome”) .setLoggingPrefs((browser: „ALL”, driver: „ALL”)) .build() ) exports.cleanupDriver = asincron (driver) => ( dacă (driver) ( driver.quit() ) process.env.PATH = process.env.PATH.replace(chromeDriverPathAddition, "") )
Acesta este un lucru complicat. Și trebuie să recunosc ceva: acest cod a fost scris în sânge (oh, și funcționează doar pe sisteme Unix). A fost scris folosind Google, Stack Overflow și documentația webdriverului și a fost puternic modificat de științifice. Dar funcționează!
În teorie, ați putea doar să copiați și să lipiți codul în teste fără să-l înțelegeți, dar să ne uităm la el pentru o secundă.
Primele două linii conectează webdriverul - un driver pentru browser. Modul în care funcționează Selenium Webdriver este că are un API (în modulul selenium-webdriver pe care îl importăm pe linia 1) care funcționează cu orice browser și se bazează pe drivere de browser pentru a... gestiona browsere diferite. Driverul pe care l-am folosit este chromedriver, importat pe linia 2.
Driverul Chrome nu are nevoie de un browser pe mașină: de fapt instalează propriul său executabil Fișier Chrome când faci instalarea npm. Din păcate, din anumite motive nu îmi pot da seama, nu îl poate găsi și directorul chromedriver trebuie adăugat la PATH (asta este exact ceea ce nu funcționează pe Windows). Facem asta pe linia 9. Îl eliminăm și din PATH în timpul pasului de curățare, pe linia 22.
Deci, am configurat driverul browserului. Acum este timpul să configuram (și să returnăm) driverul web, ceea ce facem pe liniile 11-15. Și deoarece funcția de compilare este asincronă și revine, o așteptăm folosind await.
De ce facem asta în rândurile 11-15? Motivele sunt ascunse în ceața experienței. Simțiți-vă liber să copiați și lipiți - nu sunt atașate garanții, dar folosesc acest cod de ceva vreme fără probleme.
Să începem testarea
Am terminat cu configurarea - este timpul să aruncăm o privire la codul pe care webdriver-ul îl folosește pentru a controla browserul și a testa codul nostru.
Clasificare, abordări generale ale implementării. Metode de difuzare: metoda discului de hârtie, E-test.Metodele pentru determinarea sensibilității bacteriilor la antibiotice sunt împărțite în 2 grupuri:
1. Metode de difuzie:
. folosind discuri cu antibiotice
. folosind teste E
2. Metode de diluare în serie:
. diluare în mediu nutritiv lichid (bulion)
. diluare în mediu de agar
Metodele de determinare a sensibilității au fost dezvoltate în a doua jumătate a anilor 60 - începutul anilor 70 ai secolului XX și de atunci nu au suferit modificări fundamentale din punct de vedere metodologic.
Următorii pași sunt comuni tuturor metodelor:
- prepararea si controlul calitatii mediilor nutritive
- prepararea unei suspensii de microorganisme testate (inocul)
- inoculare
- pentru metodele de difuzie - etapa de aplicare a discurilor sau benzilor E-test pe un mediu nutritiv solid.
- incubație
- înregistrarea și interpretarea rezultatelor
- formularea recomandărilor de tratament
Metodele de difuzie se bazează pe difuzarea unui medicament antibacterian (ABP) dintr-un purtător într-un mediu nutritiv solid inoculat cu un microorganism și înregistrarea diametrului zonei de inhibare (întârziere) a creșterii microorganismului studiat.
. Metoda este mai puțin sensibilă și mai puțin precisă decât metoda diluției în serie, dar este folosită mai des în practică datorită simplității sale. Postat pe ref.rf.
. Viteza de difuzie a oricărui medicament în agar depinde de structura acestuia, greutatea moleculară, prezența impurităților, compoziția și pH-ul mediului.
Metoda discurilor de hârtie cu antibiotic (metoda difuziei discului).
. Pentru a realiza această metodă utilizați roți standard, conținând o anumită cantitate de antibiotice, și un mediu nutritiv standard necesar creșterii acestui tip de microorganism. În anumite limite, diametrul zonei de inhibare a creșterii este invers proporțional cu MIC. . O suspensie bacteriană cu o anumită densitate este aplicată pe suprafața agarului într-o cutie Petri. . Se pun discuri care conțin o anumită cantitate de antibiotic. . Se incubează în condiții favorabile fiecărui microorganism specific. . Diametrele zonelor de inhibare a creșterii din jurul discului sunt măsurate în milimetri (ținând cont de diametrul discului). . Rezultatul este evaluat folosind un tabel special, comparând diametrul zonelor de inhibare a creșterii culturii testate cu valorile limită ale diametrului zonei din tabel. . Cultura studiată este clasificată în una din trei categorii: sensibilă, moderat sensibilă și rezistentă. 
E-test (E-test sau metoda epilometrică)
Metoda este apropiată ca tehnologie de metoda discului de hârtie.
. O bandă îngustă de polimer (0,5x6,0 cm) este utilizată ca purtător, pe care se aplică un gradient de concentrații de ABP (de la minim la maxim). Valorile concentrației ABP în fiecare secțiune a benzii sunt marcate pe suprafața exterioară (cu fața către cercetător).
. Inhibarea creșterii microorganismelor în jurul benzii de purtător are loc în zona în care concentrația de antibiotic care difuzează din purtător este mai mare decât MIC.
. La intersecția zonei elipsoidale de inhibare a creșterii cu banda de testare E, se obține valoarea MIC.
Testul E combină simplitatea metodei discului de hârtie cu acuratețea metodei de diluare în serie. 
Metode utilizate pentru evaluarea comparativă in vitro a medicamentelor de terapie antimicrobiană: metoda diluțiilor în serie în medii nutritive lichide și solide.
Metode de diluare în serie:
. Acestea permit cuantificarea sensibilității microorganismului izolat la agenții antibacterieni și determinarea MIC a medicamentului.
. Folosit pentru evaluarea comparativă a activității antimicrobiene in vitro a medicamentului generic în curs de dezvoltare și a medicamentului original.
. Pentru a determina valoarea CMI, se adaugă concentrații specificate de antibiotice în mediul nutritiv, care este apoi inoculat cu o cultură a microorganismului studiat. După incubare, se evaluează prezența sau absența creșterii vizibile.
. Pe baza utilizării diluțiilor în serie de două ori ale concentrațiilor ABP de la maxim la minim (de exemplu, de la 128 μg/ml, 64 μg/ml etc. la 0,5 μg/ml, 0,25 μg/ml și 0,125 μg/ml ) .
. Acestea sunt efectuate în medii nutritive lichide și agar. Metoda de diluție în serie în mediu nutritiv lichid (bulion)
Există 2 opțiuni pentru această metodă:
macrometodă (eprubetă) și micrometodă (placă).
Metoda macro.
. Testarea se efectuează în eprubete într-un volum final de 1 ml pentru fiecare diluție.
. Bulionul nutritiv se toarnă în 0,5 ml în fiecare eprubetă. Numărul de tuburi este determinat de intervalul de diluție necesar al ABP.
. Prepararea unei suspensii din microorganismele studiate:
- Se prepară o suspensie de lucru (~ 10 6 CFU/ml) dintr-o suspensie standard a fiecărui microorganism studiat (~ 10 8 CFU/ml). Prepararea diluțiilor în serie de două ori de ABP: - se prepară o soluție stoc de ABP a medicamentului generic de testat și a medicamentului de referință (original) la o concentrație de 1000 μg/ml și mai mare (ținând cont de conținutul de substanță activă) . - din soluțiile de bază ale ABP ale medicamentului generic studiat și ale medicamentului de referință (original), se prepară soluții de lucru ale ABP folosind un mediu nutritiv lichid. (Concentrația soluțiilor de lucru se calculează pe baza concentrației maxime necesare într-o serie de diluții în serie, ținând cont de factorul de diluție în timpul inoculării ulterioare cu o suspensie a microorganismului) - se prepară diluții în serie: 0,5 ml soluție de lucru de ABP se adaugă în prima eprubetă care conține 0,5 ml bulion. Se amestecă. Folosind o nouă pipetă (vârf), transferați 0,5 ml de soluție ABP în bulion într-o a doua eprubetă care conține 0,5 ml bulion etc., până când toate rândul necesar dilutii. Se scot 0,5 ml din ultimul tub. Se obțin astfel o serie de eprubete cu soluții ABP ale căror concentrații diferă de 2 ori în eprubete învecinate. Inoculare: în fiecare eprubetă se adaugă 0,5 ml dintr-o suspensie microbiană cu o concentrație de microorganisme de ~ 106 cu 0,5 ml dintr-o diluție adecvată de ABP. Concentrația finală a microorganismului în fiecare tub este de ~ 5x10 5 CFU/ml. . Control - o eprubetă cu bulion și o cultură de microorganisme (controlul creșterii). Control negativ - un tub cu bulion (controlul sterilității). . Incubare: Toate tuburile, sigilate cu dopuri sau capace, sunt incubate în condiții care asigură creșterea microorganismelor de testat. . Înregistrarea și interpretarea rezultatelor: eprubetele cu culturi sunt privite în lumină transmisă. Creșterea culturii în eprubeta cu ABP este comparată cu eprubeta de control. - prezența creșterii microorganismelor în bulion (încețoșarea bulionului) indică faptul că această concentrație a antibioticului este insuficientă pentru a-i suprima viabilitatea. - pe măsură ce crește concentrația de antibiotic, creșterea microorganismului se înrăutățește. Prima concentrație cea mai scăzută a antibioticului (dintr-o serie de diluții în serie), unde creșterea bacteriană nu este determinată vizual, este considerată a fi concentrația minimă inhibitorie (MIC). medicamente pentru terapie antibacteriană - comparați rezultatele obținute pentru medicamentul original și medicamentul generic aflat în studiu. Se face o concluzie despre echivalența lor în ceea ce privește spectrul (lista microorganismelor utilizate) și gradul de activitate antimicrobiană (valori CMI). 
. Determinarea MBC: din ultimele tuburi cu întârziere de creștere, se inoculează cu o ansă pe sectoarele unei plăci Petri. MBC, care, de regulă, este cu câteva diluții mai mică decât MIC, este considerată concentrația medicamentului în ultima eprubetă, cultura din care nu a produs creștere. . Dezavantajul metodei: productivitate scăzută - aplicarea se limitează la studiile unui număr mic de microorganisme.
Micrometoda
.Procedura de testare este similară cu cea în cazul utilizării macrometodei
.Volumul final este de până la 0,2 ml. Disponibilitatea echipamentului de laborator adecvat: o placă cu 96 de godeuri cu capace sterile, pipete cu mai multe canale. Soluțiile de lucru de ABP pot fi adăugate în avans în godeurile plăcii și apoi depozitate sigilate. în polietilenă la o temperatură sub 60°C până la momentul utilizării. . Avantajele metodei: - performanta ridicata- posibilitate de păstrare pe termen lung a tabletelor pre-preparate - economii Provizii. Postat pe ref.rf
Metoda diluțiilor în serie în mediu de agar. Principiul testului este similar cu metoda de diluare a bulionului. Prepararea unei suspensii de microorganisme testate: - o suspensie standard din fiecare microorganism testat trebuie să conţină ~ 10 8 CFU/ml. - suspensia microbiană standard pentru experiment este diluată de ~ 10 ori pentru a obține o concentrație de microorganisme de ~ 10 7 CFU/ml. Prepararea diluțiilor în serie de două ori de ABP pentru medicamentul original și medicamentul generic în studiu se efectuează în mod similar cu metoda de diluție în bulion. Mediul de agar este topit și răcit la o temperatură de 45-50°C. . Prepararea vaselor cu mediu de agar și diluții ABP: amestecați mediul de agar și soluțiile ABP direct într-o cutie Petri (pentru vase de plastic cu diametrul de 90 mm, adăugați 18 ml de agar topit și răcit la 2 ml de soluție ABP). . Inoculare și incubare: se folosește o ansă bacteriologică pentru a transfera 1-2 μl dintr-o suspensie a microorganismelor studiate pe suprafața mediului de agar. Astfel, doza finală de inocul este de ~10 4 CFU (o buclă bacteriologică standard cu un diametru de 3 mm transportă 1-2 µl de lichid). . Pe suprafața agarului se formează o pată cu diametrul de 5-8 mm. După uscare, vasele sunt răsturnate și incubate în condiții favorabile creșterii microorganismelor studiate. . Înregistrarea și interpretarea rezultatelor: similar cu metoda de diluare a bulionului. Vasele Petri sunt așezate pe o suprafață întunecată, nereflectorizantă. Concentrația de ABP care a provocat inhibarea completă a creșterii vizibile este luată ca MIC. . Martor: plăci de agar inoculate cu o suspensie de culturi de microorganisme fără ABP (controlul creșterii). Control negativ: plăci de agar (controlul sterilității). Avantajele metodei: sensibilitatea mai multor microorganisme poate fi determinată pe o singură placă.
Domeniul cercetării privind evaluarea comparativă a activității antimicrobiene in vitro pentru agenții antimicrobieni generici și originali.
Domeniul cercetării privind evaluarea comparativă a activității antimicrobiene in vitro a medicamentelor antimicrobiene generice:
.Obiectivul studiului: confirmarea conformității medicamentului generic cu referința (original) din punct de vedere al spectrului (microorganisme) și al gradului (MIC, valoarea MBC) de activitate antimicrobiană.
.Set de microorganisme testate: 1-2 tulpini din fiecare microorganism inclus in spectrul de actiune
- tulpini de colectare de referinţă
- tulpini clinice izolate în spitale
.Se determină valorile MIC și MBC
.Control: medicament de referinta - medicament original
.Rezultatul așteptat: MIC și MBC ale medicamentelor antimicrobiene generice dezvoltate se încadrează în intervalele acceptabile de valori și coincid complet cu MIC și MBC ale medicamentelor de referință (medicamente originale) în raport cu tulpinile de colectare și clinice.
Procedura pentru studiile de determinare a activității antimicrobiene in vitro a noilor compuși antimicrobieni:
.Evaluarea primară a sensibilității la noi compuși ai tulpinilor de referință ale diverselor tipuri de microorganisme gram-negative și gram-pozitive (4-5 tulpini pentru fiecare specie);
.Studiu detaliat al gradului de activitate antibacteriană a compușilor împotriva tulpinilor de microorganisme gram-negative și gram-pozitive din colecții internaționale cu mecanisme de rezistență cunoscute (metoda de diluare în serie);
.Studiul activității împotriva tulpinilor clinice de microorganisme oportuniste și patogene în comparație cu medicamente cunoscute dintr-o grupă chimică similară sau similare ca efect antimicrobian:
- in caz de activitate predominanta impotriva microorganismelor gram-pozitive, martor - peniciline naturale, cefalosporine din prima si a doua generatie, macrolide, lincosamide; - pentru activitate împotriva microorganismelor gram-negative, martor - polimixină B, aztreonam; - pentru medicamente cu spectru larg, martor - peniciline semisintetice, aminoglicozide, tetracicline, cefalosporine din generațiile III - IV
. Evaluarea activității antimicrobiene împotriva agenților patogeni problematici: stafilococi rezistenți la meticilină, pneumonie cu streptococ rezistent la benzilpenicilină, enterobacteriace rezistente la multidrog, bacterii rezistente la aminoglicozide din genul Pseudomonas etc.
.Concentraţiile terapeutice iniţiale ale noilor medicamente se stabilesc ţinând cont de toxicitatea determinată în experimentele care studiază toxicitatea acută;
. Gradul comparativ de activitate antibacteriană a medicamentelor se evaluează prin valoarea MIC sau MBC, determinată la nu mai puțin de 2 valori ale dozei de semințe: minim - 10 4 - 10 5 CFU/ml și maxim - 10 6 - 10 9 CFU /ml, în funcție de tipul de agent patogen; Până în prezent, nu există metode care să ne permită să prezicem cu o certitudine absolută efectul clinic al antibioticelor în tratamentul bolilor infecțioase. Cu toate acestea, aceste rezultate de sensibilitate pot servi ca un ghid bun pentru clinicieni pentru a selecta și ajusta terapia antibacteriană.
Cuprinsul cărții se deschide închide
1. Microbiologie farmaceutică. Subiectul și sarcinile microbiologiei farmaceutice.
2. Farmacie și produse farmaceutice: istorie de origine și dezvoltare.
3. Medicină: definiție, clasificare.
4. Compoziția medicamentelor | substanță farmaceutică, excipient.
5. Medicamente originale și generice. Denumirea medicamentelor.
10. Efectul factorilor dăunători asupra microorganismelor. Influența factorului de temperatură și utilizarea acestuia în produse farmaceutice.
11. Efectul radiațiilor asupra microorganismelor, tipuri de radiații.
12. Influența factorilor chimici dăunători asupra microorganismelor
13. Sterilizarea. Nivel de asigurare a sterilității (SAL). Criterii de alegere a unei metode de sterilizare.
14. Sterilizare termică și chimică
15. Monitorizarea eficacității dispozitivelor de sterilizare.
16. Dezinfectie industriala
17. Dezinfectante si antiseptice. Cerințe pentru dezinfectante chimice și antiseptice.
18. Conservanți și utilizarea lor în producția farmaceutică
