Méthode disco-diffusion
À la surface du milieu nutritif dense, une pelouse solide avec une culture de confiance, imposer plus de 6 disques imprégnées d'antibiotiques, à une distance d'au moins 2 cm l'une de l'autre. L'enregistrement des résultats est effectué après 18-24 heures d'incubation dans le thermostat pour le diamètre du manque de croissance autour des disques avec des antibiotiques. La présence de croissance autour du disque indique l'insensibilité de ce microbe à l'antibiotique. Des tables spéciales sont utilisées pour interpréter les résultats.
Figure 1. Définition de sensibilité
méthode de micro-organismes Disco-Diffusion Méthode:
1 - Microorganisme sensible antibiotique;
2 - Microorganisme modérément résistant antibiotique;
3 - Microorganisme durableantibiotique.
Méthode E-Test
Principe de la méthode. La détermination de la sensibilité du microorganisme est réalisée de la même manière à tester la méthode disco-diffusion. La différence est que, au lieu d'un disque avec un antibiotique, une bande de test E est utilisée, contenant un gradient de concentrations antibiotiques de maximum à minimal. À l'intersection de la zone d'ellipsis de la suppression de la croissance avec une bande de test E, la valeur de la concentration minimale accablante (IPC) est obtenue.
Figure 2. Détermination de la sensibilité des microorganismes utilisant des tests électroniques
Méthode de dilutions série dans le milieu de bouillon
Dans les tubes contenant 1 ml de bouillon MLULER-HINTON préparer une double dilution en série du médicament antibactérien, par exemple 100 μg / ml - 1er, 50 μg / ml - 2e, 25 μg / ml - 3ème, 12,5 μg / ml - 4ème, etc. Ensuite, 0,1 ml de la suspension bactérienne testée est amené à chaque tube. Dans le même temps, ils ont mis le contrôle de la croissance (bouillon MLLER-HINTON de 1 ml et 0,1 ml de suspension de bactéries). Les sèvs sont incubés à 37 ° C pendant 18 à 24 heures, après quoi les résultats marquent. Le manque d'obscurage du milieu indique un retard dans la croissance des bactéries en présence de cette concentration du médicament.
Figure 3. Détermination de la valeur de la méthode de reproduction de la CIP dans un milieu nutritif liquide
La concentration minimale accablante (MPK) est la plus petite concentration de l'antibiotique (en μg / ml ou mg / l), que in vitro supprime complètement la croissance visible des bactéries.
2 Détermination de la sensibilité de différents timbres Staphylocoques aux antibiotiques par des disques standard
|
Antibiotique |
Zone de suppression de croissance, mm |
Stumets caractéristique |
La culture étudiée est sensible à __________________________________________________
modérément résistant à _____________________________________________________________________
durable à _________________________________________________________________________________.
3 Détermination de la concentration minimale accablante (IPC) de la pénicilline par dilutions en série.
Production: La pénicilline MPK pour la souche étudiée s'élève à _____________________________________
Les avantages de la méthode: ____________________________________________________________________________
Inconvénients de la méthode: ____________________________________________________________________________
4 Détection et enregistrement d'une action antagoniste de différents types de bactéries.
Un microboniste microboniste et perpendiculaire aux souches de test informatique sont cousus au diamètre. Les résultats comptables sont effectués dans une journée après le semis. La présence et le degré d'action antagoniste sont déterminés par l'ampleur de l'épreuve de la croissance des cultures de test.
Barry semis ________________________
Production:le plus grand effet antagoniste a été identifié pour les souches de test (spécifier des espèces) _____________________________________________________________________________________________
Leçon numéro 8.
SUJET: Finale leçon sur le sujet: "Les étapes historiques du développement de la microbiologie, de la morphologie, de la physiologie et de la génétique des micro-organismes".
Formes et dimensions de vraies bactéries. Caractéristiques des formes en forme de bille, en forme de bâton et convolentales de vraies bactéries.
Structure des bactéries. Les principales différences entre la cellule procaryote d'eucaryotes.
Mur de cellules de bactéries gram-positives et gram-négatives.
Types de médicaments microscopiques. Technique préparation de médicaments fixes.
Technique de microscopie dans le microscope lumineux. L'étude de la morphologie des micro-organismes dans le microscope électronique.
Propriétés tinonnantes des microbes. Colorants. Façons simples de peindre des médicaments fixes.
Principes de la classification des procaryotes pathogènes (Berges, 2001).
Dispositifs de protection dans les micro-organismes. Différends, étapes et conditions pour le différend sur la formation, signification biologique.
Capsules de bactéries, leur signification.
Flagellas, leur structure. Cilia. Scie sexuelle.
Méthodes de peinture complexes. Technique de coloriage à Gram, Cylla Nelssen, Bururi Gins, Nasseser.
Méthodes de recherche des micro-organismes dans un état de vie. Relier. Principe de la méthode.
Spirochettes. Spirochet systématique et morphologie. Caractéristiques de l'ultrastructure et de la composition chimique. Méthodes de recherche.
Actinomycète, morphologie, ultrastructure, composition chimique. Espèces pathogènes. Le rôle des actinomycètes dans la nature et la médecine. Méthodes de détection.
Taxonomie Chlamydia. Morphologie, structure, façons d'identifier. Cycle de développement de la chlamydia.
RicketCies, morphologie, ultrastructure, composition chimique. Espèces pathogènes.
Mycoplasme. Classification. Phylogénèse. Façons d'identifier.
Formes défectueuses de microbes: protoplastes, spores, formes L.
Bactéries de puissance. Nutriments - Sources de carbone et d'azote. Classification des bactéries par des autotrophes de type alimentaire et des chimiorganotrophes
Facteurs de croissance et leurs sources. Sources d'éléments minéraux.
Méthodes et mécanismes pour le transfert de nutriments à travers la membrane.
Besoins énergétiques des bactéries. Façons d'obtenir de l'énergie à partir d'Autotrophov (photosynthèse, chimiosynthèse). Sources et façons de produire de l'énergie dans les chimiorganotrophes.
Types d'oxydation biologique aérobie et anaérobie chez les bactéries. Bactéries aérobies, anaérobies, éventuellement anaérobies et microétérophiles. Façons de créer des conditions anaérobies.
Tâches, étapes, avantages et inconvénients de la méthode de recherche bactériologique (culture).
Croissance et reproduction de micro-organismes. Méthodes de reproduction. Division binaire (simple), mécanisme. Reproduction de populations bactériennes.
Principes et méthodes de culture de bactéries. Besoins nutritionnels des microbes.
Média nutritionnel pour la culture des bactéries. Exigences pour les environnements nutritionnels. Classification des médias nutritifs.
Conditions et techniques de culture de bactéries. Technique de semis pour les supports nutritifs. Les modèles et la nature de la croissance des bactéries sur des milieux nutritifs denses et liquides.
Méthodes de libération de cultures pures de bactéries aérobies et anaérobies.
Propriétés des micro-organismes utilisés pour identifier les cultures sélectionnées.
Enzymes de bactéries, classification. Méthodes d'étude des propriétés biochimiques des microorganismes. Utilisation pratique de l'activité biochimique dans l'identification des bactéries
Détermination des propriétés suilleuses, la composition du milieu de gissage; Détermination des propriétés protéolytiques, de la détermination de l'activité Catalase et Oxidase.
Le principe de fonctionnement et de fonctionnalités de l'utilisation de dispositifs d'identification automatique des cultures bactériennes (hémocultivateur, analyseur automatique).
Caractéristiques de la culture de Rickettsies et de la chlamydia.
Bactériophages (phages). Histoire d'ouverture. Morphologie, caractéristiques structurelles, composition chimique et propriétés des phages.
Phages de Villauble. Phases d'interaction avec cellule bactérienne. Les résultats de l'interaction du phage et des cellules. Phages modérés. Prof gratte. Phénomène des contrats de location. Conversion de Fagovoy.
Méthodes d'isolement et de titrage de bactériophages sur des milieux nutritifs denses et liquides. Remplacement des phages en microbiologie et en médecine. Fagodiagnostiques et phageotypes.
Hérédité. Organisation de l'appareil génétique chez les bactéries (nucléoïde, plasmides, EST.-Extérents, transposons).
Principes de fonctionnement du génome bactérien. Organisation de l'opéro. Génotype et phénotype.
Plasmides, classification, structure et propriétés du plasmide. R-plasmide, caractéristiques de la structure et de la fonction. Plasmides bactériocynegique.
La variabilité des microbes. Modifications des bactéries, de la valeur, des principales manifestations et des propriétés (non-défense, adaptabilité, haute fréquence des modifications directes et inverse, de nombreux facteurs incidents).
Variabilité génotypique. Mutations et leur classification. Mutagène. Manifestations phénotypiques de mutations. Matières mutants. Dissociation par bactérie. Effet de la sélection. Système de réparation de dommages causés par le génome.
Variabilité de reconganisation. Mécanismes pour la formation de génomes combinés. La fréquence des changements de signes individuels. Transformation, transduction, conjugaison.
L'importance pratique des connaissances sur la génétique des microbes. Principes de cartographie génétique.
Méthodes d'analyse génétique (hybridation moléculaire, réaction de la chaîne de la polymérase, rinçage, séquençage).
Le concept d'ingénierie génétique et l'utilisation de ses méthodes en microbiologie et en biotechnologie. Obtenir et utiliser des vaccins et des cytokines génétiquement modifiés.
Événements antimicrobiens. L'effet des facteurs environnementaux sur les microbes. L'effet des facteurs physiques (température, séchage, rayonnement, ultrasons, pression osmotique). L'effet des facteurs chimiques.
Objectifs, méthodes, moyens et objets de stérilisation et de désinfection dans la pratique médicale et microbiologique. Désinfection de contrôle de la qualité. Contrôle de la stérilisation et stérilité. Méthodes de conduite.
Antiseptiques. Définition. Antiseptique, exigences, origine, propriétés, groupes, mécanismes d'action sur les microbes. Types d'antiseptiques. Antiseptique thérapeutique. Antiseptique préventif.
Médicaments chimiothérapeutiques. Propriétés. Groupes de base de chimiothérapie. Mécanismes d'action sur les bactéries. Le concept de sélectivité et de «cible».
Antibiotiques. Définition. Produits d'antibiotiques. Antibiotiques synthétiques et semi-synthétiques.
Les principaux groupes d'antibiotiques dans la structure chimique. Tétracyclines antibiotiques bêta-lactam. Aminoglycosides. Macrolides et azolides. Ansamicine (rifampicines). Lavomycétine. Antibiotiques fluoroquinolone. Lincomycine. Polymixines. Glycopeptides.
Classification des antibiotiques sur le mécanisme d'action sur la cellule bactérienne.
Mécanismes pour la stabilité des micro-organismes aux médicaments antibactériens.
Méthodes de détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques et autres médicaments de chimiothérapie. Technique de production, comptabilité et évaluation de la sensibilité par la méthode des disques, test électronique, dilutions de série.
Numéro de leçon9
SUJET: Bactéries écologiques. INFECTION. Microorganismes pathogènes. Toxines microbiennes. Méthode biologique (expérimentale).
Liste des questions de contrôle
Microflore du corps humain . Microflora normale (résident) de l'homme. Auutochton et Allochton, microflora intéquate et translucide. Formation et développement de la microflore normale. Fonctions de microflore normale: anti-infectieux, métabolique, immunobiologique, antitoxique.
Démaprobiocénose (dysbactériose), causes, types, principes de correction.
Le concept d'infection. Définition, caractéristique générale. Différences de maladies infectieuses de non-transmunérabilité.
Le rôle du microorganisme dans le processus infectieux. Dose infectante. Méthodes d'infection. Portes d'entrée. Pathogénicité et virulence. Contrôle génétique de la pathogénicité et de la virulence. Facteurs qui augmentent et réduisent la virulence microbienne.
Facteurs de pathogénicité. Méthodes de détermination de la virulence, des unités. Microorganismes pathogènes pathogènes bondérogènes et conditionnels.
Toxicité et toxigénicité des micro-organismes. Endotoxines, propriétés, reçu, application. ExoCins, Propriétés, Réception, Unités de mesure. Types d'exotoxines, mécanisme d'action.
Le rôle du macroorganisme dans le développement et le cours des maladies infectieuses. Facteurs héréditaires. État anatomie-physiologique du corps. Le rôle des conditions de vie dans le développement et le cours des maladies infectieuses. Facteurs naturels. Facteurs sociaux.
Classification des processus infectieux en gravité, la nature de l'agent pathogène, par la source d'infection, la méthode de transmission de l'agent pathogène et du mécanisme d'infection, la prévalence. Classification des processus infectieux sur la localisation de la mise au point microbienne, la durée du flux et de la multiplicité de l'infection.
Dynamique du processus infectieux, ses caractéristiques.
Méthode de recherche biologique (expérimentale), étapes, évaluation. Animaux de laboratoire. Méthodes d'infection.
Travail de laboratoire
1 étude de la microflore normale.
A) semis pour étudier la microflore normale de la peau des mains le mercredi endo et le sang Aar par réplique.
Le principe de la méthode: Morceaux stériles de papier filtre 1x1 cm dans une boîte de Pétri hydratant stérile fize. Solution. Les pincettes stériles placent un morceau de papier sur la surface de la surface de la peau de la main pendant 0,5 minute. Placez le papier à la surface d'un milieu nutritif dense (empreinte) pendant 1 min. Supprimer le papier. Tasses avec des impressions incubes à 37 0 s, 24 à 48 heures.
C) Compte tenu de la microflore de semis, préparez des préparations de différents types de colonies, de peinture à Gram, microscopie (dans les cultures de démonstration).
Comptabilisation pour semer microflora:
Microscopie des préparations:
|
Une drogue______________ _______________________ Couleur _______________ _______________________ |
Une drogue______________ _______________________ Couleur _______________ _______________________ |
2 Évaluation de l'adhésivitéE.. coli. Par leur capacité à adsorption à la surface des globules rouges
Le principe de la méthode: Suspension d'érythrocyte Ajoutez une culture de test de micro-organismes. Après incubation, les frottis sont préparés, teintés et sous le microscope déterminent le nombre moyen de bactéries qui adsorbés sur un érythrocyte.
Les érythrocytes dans ce cas sont utilisés comme modèle cellulaire d'un microorganisme sensible.
3 Détermination des enzymes invasives dans Staphylocoques
1. Plasmoagulaza
Le principe de la méthode: dans un tube à essai contenant un plasma à rideau du sang de lapin, une culture de test est faite. Après une incubation dans le thermostat, le résultat est pris en compte. Avec un résultat positif du plasma, des coagulates (coagulates).
2. Fibrinolysine
Le principe de la méthode: une culture de test est fabriquée dans un tube avec une fibrine (lavée à partir d'érythrocytes de caillot sanguin). Après une incubation dans le thermostat, le résultat est pris en compte. Avec un résultat positif, l'embrayage est dissous.
3. Haluronidase
Le principe de la méthode: une culture de test est introduite dans le tube à essai avec de l'acide hyaluronique (guk). Après incubation dans le thermostat, un réactif est ajouté, entraînant la coagulation GUK et prend en compte le résultat. Avec un résultat positif (en raison de la division de la guk), le caillot n'est pas formé.
4. Leciteletelase (lécithinase)
Le principe de la méthode: les cultures culturelles isolées de Staphylococcus tombant sur l'agar de sel yolotone, qui contient 7,5% de chlorure de sodium et la suspension jaune. Avec un résultat positif autour des colonies des staphylocoques virulentes, un halo pluvieux est formé à cause du clivage de la lécithine contenue dans le jaune d'œufs de poule.
Conclusion: (Énumérer les enzymes de virulence de chacune des deux souches étudiées) _________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Toxines bactériennes
Toxicité __________________________________________________________________________________
Toxigination _________________________________________________________________________________
Endotoxine ___________________________________________________________________________________
Choc endotoxique _______________________________________________________________________________
Application pratique des endotoxines:
Ecotoxine _______________________________________________________________________________
Anatoksin ________________________________________________________________________________________
Le schéma de production d'exotoxine et d'anatoxine.
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________________________
Application pratique des anatoxines:
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________________________
La conférence a examiné les principales méthodes de détermination de la sensibilité in vitro. Microorganismes aux préparations antimicrobiennes (disco-diffusion, tests électroniques, méthodes de dilution). Des approches de la nomination empirique et étiotropique d'antibiotiques dans la pratique clinique sont reflétées. Les problèmes d'interprétation des résultats de la détermination de la sensibilité des points de vue cliniques et microbiologiques ont été discutés.
Actuellement, dans la pratique clinique, il existe deux principes de nomination de médicaments antibactériens: empiriques et étiotropes. Nomination empirique d'antibiotiques Sur la base de la connaissance de la sensibilité naturelle des bactéries, des données épidémiologiques sur la résistance des micro-organismes de la région ou de l'hôpital, ainsi que des résultats d'études cliniques contrôlées. L'avantage incontestit du but empirique de la chimiothérapie est la possibilité d'un démarrage rapide de la thérapie. De plus, avec cette approche, les coûts de la réalisation d'études supplémentaires sont exclus.
Cependant, avec l'inefficacité du traitement antibactérien mené, avec des infections nosocomiales, lorsqu'il est difficile de supposer que l'agent pathogène et sa sensibilité aux antibiotiques cherchent à mener une thérapie étiotrope. La nomination d'antibiotiques étiotropes Cela implique non seulement la sélection de l'agent causatif de l'infection par le matériau clinique, mais également la détermination de sa sensibilité aux antibiotiques. L'obtention des données correctes n'est possible qu'avec l'exécution compétente de toutes les unités de recherche bactériologique: de prendre des matériaux cliniques, le transportant dans le laboratoire bactériologique, identifiant l'agent pathogène avant de déterminer sa sensibilité aux antibiotiques et l'interprétation des résultats obtenus.
La deuxième raison qui provoque la nécessité de déterminer la sensibilité des microorganismes aux médicaments antibactériens consiste à obtenir des données épidémiologiques sur la structure de la résistance des agents pathogènes d'infections antivol et nosocomiales. En pratique, ces données sont utilisées dans l'imposition empirique d'antibiotiques, ainsi que pour la formation de formules hospitalières.
Méthodes de détermination de la sensibilité aux antibiotiques
Les méthodes de détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques sont divisées en 2 groupes: méthodes de diffusion et de dilution.
Lors de la détermination de la sensibilité, la méthode disco-diffusion sur la surface de gélose dans le distributeur de Pétri est provoquée par une suspension bactérienne d'une certaine densité (généralement équivalente à une turbidité de 0,5 McFarland), puis placé des disques contenant une certaine quantité d'antibiotique. La diffusion de l'antibiotique dans l'agar conduit à la formation de la zone de l'augmentation de la croissance des microorganismes autour des disques. Après une incubation de tasses dans un thermostat à une température de 35 O -37 o C pendant la nuit, le résultat prend en compte le résultat en mesurant le diamètre de la zone autour du disque en millimètres ().
Image 1. Détermination de la sensibilité des micro-organismes méthode disco-diffusion.
La détermination de la sensibilité du microorganisme à l'aide du test électronique est réalisée de la même manière à tester la méthode de diffusion de disque. La différence est que, au lieu d'un disque avec un antibiotique, une bande de test E est utilisée, contenant un gradient de concentrations antibiotiques de maximum à minimal (). À l'intersection de la zone d'ellipsis de la suppression de la croissance avec une bande de test E, la valeur de la concentration minimale accablante (IPC) est obtenue.
Figure 2. Détermination de la sensibilité des micro-organismes à l'aide de tests électroniques.
L'avantage incontestable des méthodes de diffusion est la simplicité des tests et la disponibilité de l'exécution dans tout laboratoire bactériologique. Toutefois, en tenant compte du coût élevé des tests électroniques pour les travaux de routine, une méthode disco-diffusion est généralement utilisée.
Méthodes de dilution Sur la base de l'utilisation de dilutions à double consécutive de concentrations d'antibiotiques maximales à un minimum (par exemple de 128 μg / ml, 64 μg / ml, etc. jusqu'à 0,5 μg / ml, 0,25 μg / ml et 0,125 μg / ml). Dans ce cas, l'antibiotique de diverses concentrations contribuons à un milieu nutritif liquide (bouillon) ou en agar. Ensuite, la suspension bactérienne d'une certaine densité correspondant à la turbidité de 0,5 par McFarland est placée dans un bouillon antibiotique ou à la surface de l'agar de la tasse. Après une incubation pendant la nuit à une température de 35 O -37, les résultats des résultats sont pris en compte. La présence de croissance du microorganisme dans le bouillon (turbidité du bouillon) ou à la surface de l'agar suggère que cette concentration antibiotique est insuffisante pour supprimer sa viabilité. À mesure que la concentration en antibiotiques augmente, la croissance du microorganisme s'aggrave. La première plus petite concentration de l'antibiotique (d'une série de dilutions consécutives), où visuellement ne déterminent pas la croissance bactérienne est considérée comme étant considérée comme concentration minimale minimale (IPC). MPC est mesuré en mg / l ou μg / ml ().
Figure 3. Détermination de la valeur de la méthode de reproduction de la CIP dans un milieu nutritif liquide.
Interprétation des résultats de la détermination de la sensibilité
Sur la base des données quantitatives obtenues (diamètre de la zone de la croissance de la croissance antibiotique ou de la valeur MPC), les microorganismes sont divisés en sensibles, modérément résistants et résistants (). Distinguer ces trois catégories de sensibilité (ou de résistance), la soi-disant concentrations frontalières Antibiotique (ou valeurs limites du diamètre de l'augmentation de la zone de croissance du microorganisme).
Figure 4. Interprétation des résultats de la détermination de la sensibilité des bactéries conformément aux valeurs de la CIB.
Les concentrations à la frontière ne sont pas des valeurs constantes. Ils peuvent être révisés, en fonction de la variation de la sensibilité de la population de microorganismes. Le développement et la révision des critères d'interprétation sont engagés dans des experts de premier plan (chimiothérapeutes et microbiologues), qui sont inclus dans les comités spéciaux. L'une d'entre elles est la commission nationale des normes de laboratoire clinique américaines (Normes du Comité national - NCCL). Actuellement, les normes NCCLS sont reconnues dans le monde et sont utilisées comme internationale pour évaluer les résultats de la détermination de la sensibilité des bactéries avec des études microbiologiques et cliniques multicentrales.
L'interprétation des résultats de détermination de sensibilité présente deux approches: microbiologiques et cliniques. L'interprétation microbiologique est basée sur l'analyse de la répartition des valeurs des concentrations antibiotiques, accablant la viabilité des bactéries. L'interprétation clinique est basée sur une évaluation de l'efficacité de la thérapie antibactérienne.
Microorganismes sensibles (susceptibles)
Bactéries attribuées cliniquement sensibles (en tenant compte des paramètres obtenus in vitro.) Si, avec le traitement des doses standard des infections antibiotiques causées par ces micro-organismes, on observe un bon effet thérapeutique.
En l'absence d'informations cliniques fiables, la division de la catégorie de sensibilité est basée sur des données de comptabilité commune obtenues in vitro.et pharmacocinétique, c'est-à-dire Aux concentrations de l'antibiotique, réalisable sur le site d'infection (ou dans le sérum sanguin).
Microorganismes résistants (résistants)
Le résistant (durable) appartient aux bactéries lorsque, dans le traitement d'une infection causée par ces micro-organismes, il n'y a aucun effet sur la thérapie même lors de l'utilisation maximale des doses de l'antibiotique. De tels microorganismes ont des mécanismes de résistance.
Microorganismes avec résistance intermédiaire (intermédiaire)
La résistance intermédiaire cliniquement dans les bactéries est signifiée si l'infection causée par de telles souches peut avoir un résultat thérapeutique différent. Toutefois, le traitement peut réussir si l'antibiotique est utilisé dans une dose supérieure à la norme ou une infection est localisée dans un lieu où le médicament antibactérien s'accumule à des concentrations élevées.
D'un point de vue microbiologique, les bactéries à résistance intermédiaire font référence à la sous-population conforme aux valeurs de la CIB ou du diamètre des zones, entre les microorganismes sensibles et résistants. Parfois, des souches avec une résistance intermédiaire et des bactéries résistantes sont combinées dans une catégorie de microorganismes résistants.
Il convient de noter que l'interprétation clinique de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques est conditionnelle, car le résultat de la thérapie ne dépend toujours que de l'activité du médicament antibactérien contre l'agent pathogène. Les cliniciens connaissent des cas lors de la résistance des microorganismes, selon l'étude in vitro., J'ai reçu un bon effet clinique. Inversement, dans la sensibilité de l'agent causatif, une thérapie peut être observée.
Dans certaines situations cliniques, lorsque des résultats insuffisants d'une étude de sensibilité par des méthodes classiques, une concentration bactéricide minimale est déterminée.
Concentration bactéricide minimale (MBK) - la plus petite concentration de l'antibiotique (mg / l ou μg / ml), qui dans l'étude in vitro. Il provoque la mort de 99,9% des micro-organismes du niveau source pendant une certaine période.
La valeur MBC est utilisée avec un traitement antibiotique avec une action bactériostatique ou en l'absence d'effet de la thérapie antibactérienne dans une catégorie spéciale de patients. Dans des cas particuliers, pour la définition de MBC, par exemple, endocardite bactérienne, ostéomyélite ou infections généralisées chez les patients présentant un caractère immunodéficience.
En conclusion, je voudrais noter qu'aujourd'hui, il n'existe aucune méthode qui permettrait une précision absolue à prédire l'effet clinique des antibiotiques dans le traitement des maladies infectieuses. Cependant, ces résultats de la détermination de la sensibilité peuvent servir de bon point de référence aux cliniciens à choisir et à corriger la thérapie antibactérienne.
Tableau 1. Critères d'interprétation de la sensibilité des bactéries
ETEST® est une bande de plastique inerte sur laquelle une préparation antimicrobienne est appliquée à une variable de concentration par gradient de minimum à maximum, dans la plage équivalente à 15 doubles dilutions. D'autre part, la bande est appliquée à l'échelle des concentrations inhibitrices minimales correspondantes (MIC). Les tests électroniques permettent de déterminer la concentration minimale inhibitrice de la préparation antimicrobienne (méthode de diffusion quantitative).
. Calme la tasse de microorganisme.
. Placez les bandes ETEST® (jusqu'à 2 à une tasse standard d'un diamètre de 90 mm, ou jusqu'à 6 par tasse d'un diamètre de 180 mm).
. Dans le processus de culture autour de la bande, une zone d'inhibition de la croissance ellipée est formée, qui traverse la bande au point correspondant au micro.
. Les tests électroniques sont utilisés depuis plus de 20 ans.
. Plus de 100 médicaments antimicrobiens.
. STRAPS pour la détection de polyzerisme.
. Détermination de la sensibilité des micro-organismes fantaisistes, des streptocoques, des microorganismes anaérobiques, des champignons (moisissures), de la tuberculose mycobacterium, etc.
. Formulaire de sortie pratique: 30 ou 100 pièces, en blister ou en cartouche en mousse.
| Numéro de catalogue | |||||
| Individuel emballage |
Cartouche en mousse (Stockage T ° + 20 ° C / + 4 ° С) |
(STOCKAGE T ° -20 ° C) |
|||
| Nom | 30 Stripov | 100 Stripov | 30 Stripov | 100 Stripov | 30 Stripov |
| Antifongique | |||||
| É-test Amphotéricine | 526318 | 526310 | |||
| E-test anidulafungin | 532008 | 532000 | |||
| E-Test Voriconazole | 532818 | 532810 | |||
| E-Test Itraconazole | 412380 | 525818 | 525810 | ||
| E-Test Caspofung | 412269 | 532418 | 532410 | ||
| E-test kétoconazole | 525918 | 525910 | |||
| E-Test Mikafungin | 535708 | 535700 | |||
| Poskaconazole E-Test | 532118 | 532110 | |||
| E-test fluukonazole | 412350 | 510818 | 510810 | ||
| E-Test Fluducitozin | 510918 | 510910 | |||
| Anti-tuberculose | |||||
| E-Test Isoniazid | 527900 | ||||
| E-test etcutol | 527700 | ||||
| E-test Ethionamide | 527500 | ||||
| Antibactérien | |||||
| Azithromycine E-Test | 412251 | 501618 | |||
| E-Test Aztreonam | 412259 | 501718 | 501710 | ||
| E-Test Amikacin | 412219 | 501318 | |||
| E-Test amoxicilline | 412243 | 500918 | |||
| Acide d'amoxicilline E-test / acide clawulanique (2/1) | 412241 | 501018 | 501010 | ||
| E-Test ampicilline | 412253 | 501518 | |||
| E-Test ampicillin / sulbactam (2/1) | 412251* | 501818 | 501810 | ||
| E-Test Bacitracine | 528608 | 528600 | |||
| E-Test Benzylpénicilline (concentration élevée) | 412263 | 502518 | |||
| E-Test Benzylpénicilline (faible concentration) | 412265 | 502618 | |||
| Vancomycine E-Test | 412488 | 525518 | |||
| E-Test gatifloxacine | 530218 | 530210 | |||
| E-Test Gentamicine (concentration élevée) | 512708 | 512700 | |||
| E-Test Gentamicin (faible concentration) | 412368 | 512518 | |||
| Dapomycine E-Test | 412324 | 535018 | 535010 | ||
| Doxycycline E-Test | 412328*** | 509718 | 509710 | ||
| E-Test Doripen | 412326*** | 535918 | 535910 | ||
| E-Test imipenem | 412374 | 513618 | |||
| Test e-test canamycine | 527818 | 527810 | |||
| Clarithromycine E-Test | 508718 | 508710 | |||
| E-Test Clindamycine | 412315 | 509518 | |||
| E-Test Kolistin | 412317** | 537308 | 537300 | ||
| E-Test de levofloxacine | 412393 | 527418 | |||
| E-Test LineZolid | 412396 | 531318 | |||
| E-test meropénem | 412402 | 513818 | |||
| E-test métronidazole | 412404 | 530018 | |||
| E-Test Mezillins | 513708 | 513700 | |||
| E-test minocycline | 412409*** | 516018 | 516010 | ||
| Moxifloxacine E-Test | 412411** | 529018 | 529010 | ||
| Mupirocine E-Test | 412417*** | 413496 | 516300 | ||
| E-test Nalidix acide | 516508 | 516500 | |||
| Neucine E-Test | 517518 | 517510 | |||
| Nitrofurantoïne E-Test | 412426*** | 530408 | 530400 | ||
| E-Test Norflocencin | 412428** | 519508 | 519500 | ||
| E-test oxacilline | 412432 | 520518 | |||
| E-Test Offlsacin | 519618 | 519610 | |||
| Test E-Test Piperillalin | 521518 | 521510 | |||
| Test E-Test Piperillalin / Tazobactame (4mkg / ml) | 412434 | 521418 | |||
| E-Test polymixin | 533408 | 533400 | |||
| Rifampicine E-Test | 412450 | 526018 | 526010 | ||
| Spectinomycine E-Test | 529218 | 529210 | |||
| Streptomycine E-Test | 412454 | 526808 | 526800 | ||
| E-Test sulfaméthoxazole | 534118 | 534110 | |||
| Test E-Test Teicoplan | 412461 | 522018 | |||
| Teinture électronique Tétracycline | 412471 | 522518 | |||
| Taigecycycline E-Test | 412475 | 533518 | |||
| Billet billet / acide clawulanique | 522618 | 522610 | |||
| Test de Tobamycine E-Test (concentration élevée) | 533108 | 533100 | |||
| E-Test Tobramycine (faible concentration) | 522718 | 522710 | |||
| Test de triméthoplis électronique | 523618 | 523610 | |||
| E-Test Tichéoprix / sulfaméthoxazole (1/16) | 412481 | 524418 | |||
| E-test phosphomycine | 529108 | 529100 | |||
| E-Test Fusidiyev Acide | 511518 | 511510 | |||
| E-Test Hinpriristin / Dalfopoid | 528718 | 528710 | |||
| Chloramphénicol e-test | 412309 | 507518 | 507510 | ||
| CEFACOR E-TEST | 504518 | 504510 | |||
| Test E-Test Céphalotin | 412307 | 503518 | 503510 | ||
| E-test cefepim | 412273 | 505018 | 505010 | ||
| E-test zefisim | 412275 | 529918 | 529910 | ||
| CEFOXITINE E-TEST | 412285 | 506518 | 506510 | ||
| Céfopérazone E-Test / Sulbactam (2/1) | 529318 | 529310 | |||
| CEFOTAXIM E-TEST (concentration élevée) | 412279 | 505518 | |||
| CEFOTAXIM E-TEST (Concentration faible) | 412281 | 505618 | |||
| CEFÉTAN E-TEST | 506308 | 506300 | |||
| E-test cefrit | 506408 | 506400 | |||
| E-test cefpodoxyme | 505818 | 505810 | |||
| E-Test Ceftazidim | 412293 | 506718 | |||
| E-Test Ceftaroline | 412291 | ||||
| E-Test céfitioxime | 527308 | 527300 | |||
| E-Test Ceftobiprol | 412297 | ||||
| Céftriaxone E-Test (concentration élevée) | 412301 | 506618 | 506700 | ||
| Céftriaxone E-Test (faible concentration) | 412303 | 507018 | 507000 | ||
| CEFUROXIME E-TEST | 506918 | 506910 | |||
| Test électronique ciprofloxacine | 412311 | 508618 | |||
| E-Test enrofloxacine | 528908 | 528900 | |||
| E-test Erythromycine | 412334 | 510518 | |||
| Ertapène E-Test | 412332 | 531618 | 531610 | ||
| Numéro de poche Catalogue |
|||
| Individuel emballage |
Emballage en plastique (STOCKAGE T ° -20 ° C) |
||
| Nom | 30 Stripov | 100 Stripov | 30 Stripov |
| Détermination du polyzerisme | |||
| E-Test CEFOTAXIM / CEFOTAXIM + Acide clawulanique (4 μg / ml) |
412336** | 532208 | 532200 |
| E-Test Ceftazidim / Ceftazidim + acide clavulanique (4 μg / ml) Conçu pour déterminer la présence d'enzymes des bêta-lactamas du spectre prolongé (BLRS) inhibé par l'acide clavulanique, dans les bactéries gram-négatives, y compris Klebsiella SPP., Escherichia coli, Proteus Mirabilis, Autres représentants de la famille Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412340** | 532508 | 532500 |
| E-test CEFEPIM / CEFEPIM + acide clavulanique (4 μg / ml) Conçu pour déterminer la présence d'enzymes des bêta-lactamas du spectre prolongé (BLRS) inhibé par l'acide clavulanique, dans les bactéries gram-négatives, y compris Klebsiella SPP., Escherichia coli, Proteus Mirabilis, Autres représentants de la famille Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412338** | 534708 | 534700 |
| Le test électronique de l'IMIPENEM / IMIPENEM + EDTA est destiné à déterminer la présence d'enzymes métalliques-bêta-lactamase dans les bactéries à Gram négatif, y compris Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. | 534208 | 534200 | |
| E-Test Vancomycin / Takecoplan Conçu pour déterminer la stabilité (ou la stabilité modérée) aux glycopeptides de bactéries gram-positives, y compris Staphylococcus aureus, Enterococcus spp. |
537208 | 537200 | |
| E-Test Cefothetan / Cefotan + Claxacilline Conçu pour déterminer la présence d'enzymes AMPC-BETA-LACTAMASE dans les bactéries gram-négatives |
537108 | 537100 | |
Dans cette partie, nous examinerons par le biais de tests (E2E): testez toute la demande entièrement, nous le ferons du point de vue de l'utilisateur, en fait, automatisez toutes ses actions.
Dans notre cas, la demande consiste uniquement au frontalement - Beckend n'est tout simplement pas, donc E2E Test pourra ouvrir une application dans un navigateur réel, effectuant un ensemble de valeurs de validité et de vérification de la validité de l'écran.
Dois-je vérifier toutes les permutations, comment avons-nous fait dans les tests de l'unité? Non, parce que c'est déjà vérifié! Dans les tests E2E, nous vérifions la performance des unités non individuelles, mais tout le système immédiatement.
Combien faut-il les tests E2E?
La première raison pour laquelle il devrait y avoir de nombreux tests, - une intégration bien écrite et des tests unitaires devraient suffire. Les tests E2E doivent vérifier que tous les éléments sont correctement interconnectés.
La deuxième raison est-elle lente. S'il y en a des centaines d'entre eux, comme des tests d'unités et une intégration, les tests passent ensuite très longue.
La troisième raison est le comportement imprévisible des tests E2E. À propos d'un tel phénomène est un article dans le blog de Google dédié aux tests. Dans les tests de l'unité, il n'y a pas de comportement si instable. Ils peuvent passer, puis tomber - et sans changements visibles, exclusivement due à des E / S. Est-il possible de supprimer l'imprévisibilité? Non, mais vous pouvez le minimiser.
Pour vous débarrasser de l'imprévisibilité, faites aussi peu de tests E2E que possible. Ecrivez un test E2E pendant dix autres, et seulement quand ils sont vraiment nécessaires.
Nous écrivons des tests E2E
Passons à l'écriture des tests E2E. Nous avons besoin de deux choses: navigateur et serveur pour notre code avant.
Au début, consultez le paramètre Web Server.
Configuration d'un serveur Web dans MOCHA
Serveur Web sur le nœud? Express vous vient immédiatement à l'esprit, voyons le code:
Laissez le serveur avant ((Terminé) \u003d\u003e (const app \u003d express () app.use ("/", express.static (chemin.Resolve (__ dirname, "../../dist"))) Server \u003d App . Écoute (8080, DONE))) Après (() \u003d\u003e (server.frose ()))
Dans la fonction avant, nous créons une application Express, spécifiez le dossier DIST et enregistrez Écoutez le port 8080. Dans la fonction AFFERTER, nous «tuerons» le serveur.
Dist Dossier est l'endroit où nous stockons nos scripts JS et où vous copiez des fichiers HTML et CSS. Vous pouvez voir ce que nous faisons dans le script de montage NPM dans Package.json:
("Nom": "Test frontal", "scripts": ("Build": "Webpack && cp Public / * dist", "Test": "MOCHA" TEST / ** / TEST - *. JS "&& ESLINT Test lib ", ...),
Cela signifie que pour les tests E2E, vous devez d'abord exécuter la version de RUN de NPM, puis le test NPM. Oui, il est inconfortable. Dans le cas des tests unitaires, il n'est pas nécessaire de le faire, car ils commencent sous le nœud et ne nécessitent pas de diffusion et d'assemblage.
Pour complétude, jetons un coup d'œil sur webpack.config.js, où il est décrit comment WebPack devrait faire l'assemblage du fichier:
Module.exports \u003d (entrée: "./lib/app.js", sortie: (nom de fichier: "bundle.js", chemin: path.Resolve (__ dirname, "dist")), ...)
Le dossier DIST est utilisé à la fois dans l'environnement utilisateur et dans les tests E2E. Il est important - d'exécuter des tests E2E est nécessaire dans des environnements, autant que possible sur "Combat".
Configuration d'un navigateur dans MOCHA
Notre application est installée sur le serveur - il reste seulement pour exécuter un navigateur pour lui. Quelle bibliothèque utiliserons-nous pour automatiser? J'utilise habituellement un sélénium-webriver populaire.
Pour commencer, voyons comment nous l'utilisons avant de commencer à gérer les paramètres:
Const (préparériver, nettoyagedriver) \u003d nécessite ("../ Utils / navigateur-automatisation") // ... décrivez ("application de calculatrice", fonction () (Laissez le pilote ... avant (ASYNC () \u003d\u003e (conducteur \u003d Await prépareraRiver ())) Après ((() \u003d\u003e CleanUpDiver (pilote)), il ("devrait fonctionner", fonction async () (attendre Driver.get ("http: // localhost: 8080") // ... )))))))
Dans la fonction avant, nous préparons le conducteur et dans latéralement, nous le nettoyons. La préparation du pilote exécutera un navigateur et le nettoyage est de le fermer. Notez que le paramètre de pilote est asynchrone et nous pouvons utiliser asynchrones / attendre pour rendre le code plus beau.
Dans la fonction de test, nous ouvrons l'adresse http: // localhost: 8080, à nouveau à l'aide de l'attente, étant donné que le pilote.get est une fonction asynchrone.
Alors, comment se préparent-ils et nettoyez-vous?
Const webdiver \u003d nécessite ("selenium-webdriver") const chromedriver \u003d nécessite ("chromedriver") const-pat \u003d nécessite ("chemin") const chromedriverpathhaddition \u003d `: $ (chemin.dirname (chromedriver.path))` Exporters.preparaRiver \u003d async () \u003d\u003e (processus.on ("beforeeexit", () \u003d\u003e this.browser && this.browser.quit ()) processus.env.path + \u003d chromedriverpathaddition Retour en attente de nouveau webdiver.builder () .DisableVironMoverrides () .Forbrowser ("chrome") .setloggingprefs ((navigateur: "All", pilote: "Tous")) .build ()) exports.cleanupdiver \u003d async (pilote) \u003d\u003e (conducteur) ) processus.env.path \u003d processus.env.path.replace (chromedriverpathhaddition, ""))
C'est une chose difficile. Et je dois admettre quelque chose: ce code a été écrit par le sang (O, et cela ne fonctionne que dans UNIX Systems). Il a été écrit avec Google, un débordement de pile et une documentation WebDriver et est fortement modifié par TYK scientifique. Mais ça marche!
Théoriquement, vous pouvez simplement gronder du code dans vos tests, sans le comprendre, mais regardons-le pendant une seconde.
Les deux premières lignes sont connectées à WebDriver - Pilote de navigateur. Le principe de fonctionnement de Selenium WebDiver est disponible API (dans le module Selenium-webDriver, que nous importatons dans la ligne 1), qui fonctionne avec n'importe quel navigateur et s'appuie sur les pilotes de navigateur pour ... Gérer divers navigateurs. Le conducteur que j'ai utilisé est chromedriver importé dans la ligne 2.
Le pilote chrome n'a pas besoin d'un navigateur en voiture: il installe en fait son propre fichier exécutable chrome lorsque vous effectuez l'installation NPM. Malheureusement, pour une raison quelconque, je ne peux pas comprendre, il ne peut pas le trouver, et le répertoire chromedriver doit être ajouté au chemin (c'est exactement ce qui ne fonctionne pas dans Windows). Ceci nous faisons en ligne 9. Nous l'enlevons également de la voie à l'étape de nettoyage, à la ligne 22.
Nous avons donc configuré le pilote de navigateur. Il est maintenant temps de configurer (et de retourner) un pilote Web que nous faisons dans les lignes 11-15. Et puisque la fonction de construction d'Asynchronne et retourne, nous l'attendons avec attendre.
Pourquoi le faisons-nous dans des rangées 11-15? Les causes sont cachées par l'expérience de brouillard. N'hésitez pas à copier - aucune garantie n'est attachée, mais j'ai utilisé ce code pendant un certain temps et il n'y avait aucun problème.
Commençons les tests
Nous avons terminé le paramètre - il est temps de regarder le code qui utilise WebDriver pour gérer le navigateur et tester notre code.
Classification, approches générales de conduite. Méthodes de diffusion: Méthode de disques en papier, E-Test.Les méthodes de détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques sont divisées en 2 groupes:
1. Méthodes de diffusion:
. Utiliser des disques antibiotiques
. Avec l'aide de tests e-tests
2. Méthodes de dilutions série:
. Dilution dans le milieu nutritif liquide (bouillon)
. Reproduction dans un milieu de gélose
Les méthodes de détermination de la sensibilité ont été développées dans la seconde moitié des années 60 - premières années 70 du XXe siècle et depuis le point de vue méthodologique ne subissent pas de changements fondamentaux.
Pour toutes les méthodes, les étapes suivantes sont courantes:
- Préparation et inspection de la qualité des éléments nutritifs
- Préparation de la suspension des microorganismes étudiés (inoculum)
- Inoculation
- Pour les méthodes DIFUzionales - la phase d'application des disques ou des bandes d'essai électronique sur un milieu nutritif dense.
- incubation
- Comptabilité et interprétation des résultats
- Référence des recommandations de traitement
Les méthodes de diffusion sont basées sur la diffusion du médicament antibactérien (ABP) du support à un milieu nutritif dense, un microorganisme inoculé et enregistrant le diamètre de l'inhibition de la zone inhibitrice (retard) de la croissance du microorganisme étudié.
. La méthode est moins sensible et moins précise que la méthode de dilution série, mais dans la pratique, elle est utilisée plus souvent en raison de sa simplicité. Publié sur Ref.RF.
. Le taux de diffusion dans l'agar de tout médicament dépend de sa structure, de son poids moléculaire, de sa présence d'impuretés, de composition et de pH du milieu.
La méthode des disques de papier avec un antibiotique (méthode discodiffusion).
. Pour cette méthode, des disques standard contenant une certaine quantité d'antibiotiques et un milieu nutritif standard nécessaire pour développer ce type de microorganisme sont utilisés. Au cours de certaines limites, la magnitude du diamètre de la zone de croissance est inversement proportionnelle à la CIB. . Une suspension bactérienne d'une certaine densité est appliquée à la surface de l'agar du déplacement de Pétri. . Placez les disques contenant une certaine quantité d'antibiotique. . Incuber avec des traînées favorables pour chaque microorganisme spécifique. . Mesurer les diamètres des zones de retard de croissance autour du disque en millimètres (en tenant compte du diamètre du disque). . Évaluez le résultat selon une table spéciale en comparant le diamètre des zones de retard de croissance testées par la zone avec des valeurs de diamètre de la zone limite dans le tableau. . La culture étudiée fait référence à l'une des trois catégories: sensible, modérément sensible et stable 
Test électronique (méthode e-test ou épisirométrique)
La méthode est proche selon la technologie des disques de papier.
. Une bande de polymère étroite (0,5x6,0 cm) est utilisée comme support (0,5х6,0 cm), ce qui provoque un gradient des concentrations de l'ABP (du minimum au maximum). Les valeurs de la concentration de l'ABP dans chaque partie de la bande sont appliquées sur l'extérieur (adressée au chercheur) de la surface.
. L'inhibition de la croissance du microorganisme autour des bandes de support se produit dans la zone où la concentration antibiotique diffuse du support est supérieure à la CIB.
. À l'intersection de la zone ellipseed de la suppression de la croissance avec une bande de l'ED, le MPK est obtenu.
E-Test combine la simplicité de la méthode des disques en papier et la précision de la méthode de sélection de masse 
Méthodes utilisées pour l'estimation comparative des médicaments in vitro de thérapie antimicrobienne: la méthode de dilutions en série dans des milieux nutritifs liquides et denses.
Méthodes de dilutions série:
. Vous permet de quantifier la sensibilité du microorganisme dédié aux agents antibactériens et de déterminer l'IPC du médicament.
. Utilisé pour une estimation comparative de l'activité antimicrobienne in vitro de préparation développée - des moyens génériques génériques et originaux.
. Pour déterminer l'ampleur de l'IPC, les concentrations antibiotiques prédéterminées sont apportées au milieu nutritif, que la culture du microorganisme étudié est ensuite ensemencée. Après une incubation, la présence ou l'absence de croissance visible est estimée.
. Sur la base de l'utilisation de doubles dilutions consécutives des concentrations de l'ABP du maximum à minimal (par exemple, de 128 μg / ml, 64 μg / ml, etc. jusqu'à 0,5 μg / ml, 0,25 μg / ml et 0,125 μg / ml).
. Menée dans les milieux nutritionnels liquides et agar. Méthode de dilution en série dans le milieu nutritif liquide (bouillon)
Il y a 2 options pour cette méthode:
Macrometeode (tube à essai) et micrométode (tablette).
Macrolet.
. Le test est effectué dans des tubes à essai dans un volume fini de 1 ml pour chaque dilution.
. Le bouillon nutritif est mis en bouteille à 0,5 ml dans chaque tube à essai. Le nombre de tubes détermine la plage de reproduction rouge nécessaire.
. Préparation de la suspension des micro-organismes étudiés:
- De la suspension standard de chaque micro-organisme à l'étude (~ 10 8, CFU / ml) prépare une suspension de travail (~ 10 6 CFU / ml). Préparation de dilutions en série ABP: - Préparez la solution principale de l'ABP de la préparation de la préparation étudiée et de la préparation de comparaison (originale) à une concentration de 1000 μg / ml et plus (en tenant compte du contenu de la teneur en substance active). - Les solutions de base de l'ABP de la préparation générique et de comparaison de médicaments étudiés (original) préparent des solutions de travail de l'ABP à l'aide du milieu nutritif liquide. (La concentration de solutions de travail est calculée sur la base de la concentration maximale requise dans un certain nombre de dilutions de série, en tenant compte du facteur de dilution lors de l'inoculation ultérieure de la suspension de microorganisme), des dilutions série sont préparées: 0,5 ml d'une solution de travail de L'ABP est amené au premier tube contenant 0,5 ml de bouillon. Remuer. Une nouvelle pipette (pointe) est transférée à 0,5 ml d'une solution ABP dans le bouillon au deuxième tube à essai contenant 0,5 ml de bouillon, etc. jusqu'à ce que toute la série de reproduction nécessaire soit préparée. Du dernier tube à essai 0,5 ml est retiré. Ainsi, une rangée de tubes avec des solutions ABP, des concentrations dans lesquelles diffèrent des tubes de test adjacents de 2 fois. Inoculation: 0,5 ml de suspension microbienne avec une concentration de micro-organisme d'~ 10 6 est ajouté à chaque tube avec 0,5 ml de la reproduction correspondante de l'ABP. La concentration finale de microorganisme dans chaque tube à essai ~ 5x10 5 CFU / ml. . Contrôle - Tube d'essai avec bouillon et culture du microorganisme (contrôle de la croissance). Contrôle négatif - Tube tubercule (contrôle de la stérilité). . Incubation: Tous les tubes à essai, fermé par des bouchons ou des bouchons, sont incubés dans des conditions garantissant la croissance des tests des microorganismes. . Comptabilité et interprétation des résultats: Les éprouvettes avec des cultures sont visualisées dans la lumière transmise. La croissance de la culture dans un tube avec un ABP est comparée au tube de commande. - La présence de la croissance du microorganisme dans le bouillon (turbidité du bouillon) indique que cette concentration antibiotique est insuffisante pour supprimer sa viabilité. - À mesure que la concentration en antibiotiques augmente, la croissance du microorganisme s'aggrave. La première plus petite concentration de l'antibiotique (d'une série de dilutions consécutives), où la croissance bactérienne est déterminée visuellement, elle est considérée comme une concentration accablante minimale (IPC). Traitement antibactérien Médicaments - Comparez les résultats obtenus pour la drogue d'origine et le générique étudié LS. Ils concluent leur équivalence contre le spectre (la liste des microganismes utilisés) et le degré d'activité antimicrobienne (valeurs IPC). 
. Définition de MBK: des rares tubes de test avec un délai de hauteur, faites un secteur de la boucle sur les secteurs de la boîte à plat de Pétri. Pour MBK, qui, en règle générale, pour plusieurs dilutions est inférieure à la CIB, la concentration de la drogue dans le dernier tube à essai, semis parmi laquelle ne donnait pas de croissance. . Manque de méthode: faible performance - L'application est limitée aux études d'un petit nombre de micro-organismes.
Microméde
. La procédure de test est similaire à celle lorsque vous utilisez le macromètre
La présentation du volume final est de 0,2 ml jusqu'à 0,2 ml. L'équipement pertinent du laboratoire: une tablette pour 96 trous avec des couvertures stériles, des pipettes multicanaux. Les solutions de travail de l'ABP peuvent être faites dans la tablette Wells à l'avance, après quoi ils sont stockés dans du polyéthylène à des températures inférieures à 60 ° C. Le moment d'utilisation. . Les avantages de la méthode: - Haute performance - la possibilité d'un stockage à long terme des consommables de comprimés pré-préparés. Publié sur ref.rf
Méthode de dilutions série dans le milieu de gélose. Le principe des tests est similaire à la méthode de reproduction dans le bouillon. Préparation de la suspension des micro-organismes étudiés: - La suspension standard de chaque microorganisme étudié doit contenir ~ 10 8 CFU / ml. - La suspension microbienne standard pour l'expérience est divorcée par environ 10 fois pour obtenir une concentration de micro-organismes de ~ 10 7 CFU / ml. Préparation de dilutions série à double fois ABP pour le médicament d'origine et le médicament étudié générique est effectuée de la même manière que la méthode de reproduction dans le bouillon. Le milieu de gélose est fondu et refroidi à une température de 45 à 50 ° C. . Préparation des tasses avec un milieu agarisé et une dilution de l'ABP: Mélangez le milieu de gélose et les solutions de l'ABP directement dans les boîtes de Pétri (pour les tasses en plastique d'un diamètre de 90 mm à 2 ml de la solution ABP ajouter 18 ml de fusion et agar réfrigéré). . Inoculation et incubation: Les boucles bactériologiques transfèrent 1-2 μL de suspension des micro-organismes étudiés à la surface du milieu de gélose. Ainsi, la dose de semis finale est ~ 10 4 noyau (boucle bactériologique standard d'un diamètre de 3 mm tolère 1-2 μL de fluide). . Sur la surface de l'agar, une tache d'un diamètre de 5 à 8 mm est formée. Après séchage des tasses, les tasses sont retournées et incubées dans des conditions favorables à la croissance des microorganismes étudiés. . Comptabilité et interprétation des résultats: Semblable à la méthode de reproduction dans le bouillon. Les boîtes de Pétri sont placées sur une surface de lumière sombre et non réfléchissante. Pour l'IPC, prenez la concentration de l'ABB, qui a provoqué une inhibition complète de la croissance visible. . Contrôle: suspension inoculée des cultures de micro-organismes de tasses avec agar sans ABP (contrôle de la croissance). Contrôle négatif: tasses avec agar (contrôle de la stérilité). Les avantages de la méthode: sur une tasse, vous pouvez déterminer la sensibilité de plusieurs micro-organismes.
Le volume d'études sur une estimation comparative de l'activité antimicrobienne in vitro des outils de thérapie antimicrobienne génériques et originaux.
Le volume d'études sur une estimation comparative d'activité antimicrobienne in vitro des médicaments antimicrobiens génériques:
Recherche de recherche: confirmation de la correspondance de la référence médicamenteuse générique (originale) sur le spectre (microorganismes) et au degré (MPC, MBC) de l'activité antimicrobienne.
Test de micro-organismes testés: 1-2 souche de chacun des micro-organismes inclus dans le spectre
- Collectible de référence
Douches cliniques dans les hôpitaux
Les valeurs de la CIB et du MBC sont déterminées.
. Contrôle: la préparation de la comparaison est le médicament d'origine
Le résultat résultant: IPC et MBC développé des médicaments antimicrobiens génériques sont inclus dans les gammes de valeurs admissibles et coïncident complètement avec les préparations de comparaison IPC et MBC (médicaments originaux) pour les souches collectibles et cliniques.
La procédure d'études par définition une activité antimicrobienne in vitro de nouveaux composés antimicrobiens:
Une première valorisation de la sensibilité aux nouveaux composés de souches de référence de divers types de microorganismes gram-négatifs et gram-positifs (4-5 souches pour chaque type);
. Étude détaillée du degré d'activité antibactérienne des composés contre les souches de microorganismes gram-négatifs et gram-positifs de collections internationales avec des mécanismes de résistance bien connus (méthode de dilution en série);
. Enquête sur l'activité contre les souches cliniques de microorganismes conditionnellement pathogènes et pathogènes par rapport aux médicaments connus proches du groupe chimique ou similaire à l'effet antimicrobien:
- dans le cas de l'activité préférentielle contre le contrôle des micro-organismes à gram-gramme - pénicillines naturelles, céphalosporines I-II générations, macrolides, lincoosamide; - en activité en ce qui concerne le contrôle des microorganismes gram négatifs - Polymixin B, azitreon; -Pour préparations d'une large gamme de contrôle d'action - pénicillines semi-synthétiques, aminoglycosides, tétracyclines, céphalosporines III - IV Generations
. Évaluation de l'activité antimicrobienne contre les agents pathogènes problématiques: Pneumonie Staphylocoque résistante à la méthicilline, résistant à la résistance à la multiplesse, résistant aux pseudomonas génomoglycosides, etc.
. Les premières concentrations thérapeutiques de nouveaux médicaments sont établies en tenant compte de la toxicité définie dans les expériences sur l'étude de la toxicité aiguë;
. Le degré comparatif d'activité antibactérienne des médicaments est estimé par la quantité d'IPC ou MBC, déterminé par NO inférieure à 2 valeurs de la dose de semences: minimum - 10 4 - 10 5 CFU / ml et maximum - 10 6 - 10 9 CFU / ml en fonction du type d'agent pathogène; À ce jour, aucune méthode permettrait une précision absolue de prédire l'effet clinique des antibiotiques dans le traitement des maladies infectieuses. Cependant, ces résultats de la détermination de la sensibilité peuvent servir de bon point de référence aux cliniciens à choisir et à corriger la thérapie antibactérienne.
Table des matières ouvertes fermer
1. Microbiologie pharmaceutique. Le sujet et les tâches de la microbiologie pharmaceutique.
2. Pharmacie et produits pharmaceutiques: l'histoire de l'émergence et du développement.
3. Drogue: Définition, classification.
4. Composition de médicament | Substance pharmaceutique, excipient.
5. Drogues originales et génériques. Nom des médicaments.
10. L'action des facteurs dommageables pour les microorganismes. L'effet du facteur de température et de son utilisation en produits pharmaceutiques.
11. Effet du rayonnement sur les micro-organismes, types de rayonnement.
12. Impact sur les micro-organismes de facteurs dommageables chimiques
13. Stérilisation. Niveau de garantie de la stérilence (Sal). Critères de sélection de la méthode de stérilisation.
14. Stérilisation thermique et chimique
15. Contrôle de l'efficacité des dispositifs de stérilisation.
16. Désinfection industrielle
17. Désinfectants et antiseptiques. Exigences relatives aux désinfectants chimiques et aux antiseptiques.
18. Les conservateurs et leur utilisation dans la production pharmaceutique
